刘彩红，郭志鹏，闫 峰，艾 清

(吉林大学第一医院，长春130031)

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最严重和最常见的微血管并发症之一，是引起终末期肾功能衰竭的主要原因［1，2］。DN早期肾脏的病理改变是可逆的，一旦达到临床蛋白尿期，患者将出现肾功能不全，病情进展迅速。因此，如能及早诊断并干预治疗，可以阻止病情发展［3］。研究发现，尿蛋白电泳技术可对糖尿病患者尿液蛋白成分进行分析，根据尿蛋白分子大小及组成成分判断尿蛋白的来源及损伤的部位。十二烷基硫酸钠—琼脂糖凝胶电泳(SDS-AGE)较传统的电泳技术更为快捷和简便，更符合目前临床需求。本实验通过对糖尿病患者的非浓缩尿进行SDS-AGE分析，并探讨此技术在糖尿病肾损伤诊断中的应用价值。

临床资料:选择我院收治的糖尿病患者132例，男78例，女54例;年龄14～77岁;病程1～21 a;均符合1999年WHO糖尿病专家委员会制定的糖尿病诊断标准;排除标准:①近1个月内发生脑卒中、冠心病患者;②合并高血压患者;③近期使用过肾毒性药物者;④严重的心、肝、血液、结缔组织病者;⑤妊娠及泌尿系统感染者。尿蛋白定性(-)65例，(±)32例，(+)16例，(++)10例，(+++)9例。

SDS-AGE分析方法:所需仪器及试剂为HYDRASYS全自动电泳仪、扫描仪及配套试剂盒(法国Sebia公司)，Siemens BNII全自动蛋白分析仪，尿液干化学分析仪H-500及配套尿液分析试纸条(迪瑞医疗科技股份有限公司)，BECKMAN COULTER Allegra X-15R台式冷冻离心机，生理盐水(用于尿液的稀释)。①标本收集与处理:收集患者新鲜非浓缩尿10 mL左右，采用尿液干化学分析仪H-500作尿蛋白定性。定性完成后，将尿液于离心机2 000 r/min离心5 min，取上清于EP管中-80℃冰箱冰冻保存、备用。②操作方法:a.将冰冻保存的尿液室温放置完全解冻，尿蛋白定性(+++)的用生理盐水稀释至(++)或以下，定性(++)或以下的标本可直接使用。b.取20μL SDS溴芬兰溶液加入一次性试管中，将80μL待测尿液加入其中，充分混匀约5 min。c.接通HYDRASYS仪器的电源，将琼脂糖凝胶置于电泳板上，取②中的混合液5μL加入凝胶孔中，装上缓冲条带。d.启动电泳程序，电泳25 min，烘片55 min，染色15 min，脱色55 min，固定10 min。e.扫描并记录结果，在570 nm波长下扫描电泳胶片。

结果:尿蛋白电泳结果见表1。

表1 尿蛋白电泳结果(例)

讨论:DN是糖尿病患者最严重、最常见的微血管并发症之一，是引起糖尿病患者死亡的最主要原因之一。近年来，随着糖尿病患者生存期的延长，DN的发病率呈逐年上升趋势。DN早期肾脏损伤尚处于可逆阶段，随着病情的进展，进入临床蛋白尿期，肾脏病变将不可逆转，直至发展为肾功能衰竭，因此DN早期诊断并对其进行干预，对患者来说意义重大。

蛋白尿是肾脏损伤的表现之一，了解蛋白尿的组成可间接判断肾脏损伤的部位及程度。SDS-AGE利用蛋白质与SDS连接，形成SDS-蛋白质复合物，SDS-蛋白质复合物在具有筛选功能的琼脂糖凝胶介质上电泳，蛋白质按照其分子量大小进行分离，通过区分不同位置的蛋白质条带，判断蛋白质分子的大小，进而可以判断肾脏损伤部位。正常尿液内蛋白含量甚微，多为生理性蛋白尿，含量50～150 mg/d，主要成分为白蛋白(30 mg/d以下)。当肾小球通透性增高或滤膜缺损时，导致正常情况不被肾小球滤膜通过的中、高分子蛋白质(超过70 kD)在尿中出现称肾小球性蛋白尿。肾小管受损时，尿中低分子蛋白(＜70 kD)排泄量增大，称肾小管性蛋白尿。混合性蛋白尿是肾小管和肾小球同时病变出现高、中、低分子型蛋白区带。

报道［4］认为，SDS-AGE非浓缩尿蛋白电泳与肾活检结果相符。近年来，肾脏组织活检一直是诊断肾脏损伤部位及程度的金标准，但肾穿刺属于创伤性诊断技术，可能造成出血、感染等并发症，且穿刺技术及取材部位也会影响穿刺的成败，给患者带来创伤较大，患者及家属心存顾虑。而SDS-AGE能在无创伤的情况下对尿蛋白组分进行分析，且患者尿液不需要浓缩可直接检测，缩短了检测时间;而且以琼脂糖为琼脂的主要成分，受固体支持物影响小，支持体的透明度高，提高了检测灵敏度和敏感度(敏感度为15 mg/L)［5］，可用于糖尿病早期肾损伤的诊断评价。本研究显示，本组出现混合性蛋白尿29例，肾小球性蛋白尿18例，肾小管性蛋白尿25例，说明患者肾小球、肾小管或两者均损伤;出现生理性蛋白尿或蛋白尿阴性60例，说明患者处于正常生理状态，肾组织未损伤。上述结果提示，SDS-AGE可以发现糖尿病肾损伤，根据电泳胶片不同区域出现的蛋白条带判断肾脏损伤的部位，根据蛋白条带的深浅粗略估计肾脏损伤程度。了解尿液蛋白组分及含量的变化，对肾损伤的诊断、指导治疗、判断预后很重要，SDS-AGE用于糖尿病早期肾损伤的诊断评价是一种有效的方法。

［1］Cooper ME.Is diabetic nephropathy disappearing from clinical practice［J］.Pediatr Diabetes，2006，7(5):237-238.

［2］Jorsal A，Tamow L，Lajer M，et al.The PPAR gamma 2 Pro 12Ala variantpredicts ESRD and mortality in patients with type 1 diabetes and diabeticnephropathy［J］.Mol Genet Metab，2008，94 (3):347-351.

［3］Levey AS，Coresh J，Balk E，et al.National kidney foundation practice guidelines for chronic kidney disease:evaluation，classification，and stratification［J］.Ann Intern Med，2003，139(2): 137-147.

［4］沈霞，张敏华，汪萍，等.非浓缩尿蛋白电泳的临床应用［J］.中华检验医学杂志，2008，24(5):266-268.

［5］吴宇芳，关晓东.肾脏病患者尿蛋白电泳测定及其病理活检对比分析［J］.现代预防医学，2007，34(4):873-874.