徐 鹏，宋斾文，章仁杰，刘 超，申才良

大鼠神经干细胞的体外分离培养及分化研究

徐 鹏1，宋斾文1，章仁杰1，刘 超2，申才良1

目的建立新生SD大鼠神经干细胞（NSCs）的分离培养、体外分化、鉴定及体外长期培养的方法，并探讨血清浓度对NSCs分化的影响。方法取新生SD大鼠大脑组织，用无血清培养技术培养NSCs。采用免疫荧光技术对NSCs进行鉴定，检测其巢蛋白（Nestin）表达。用含有不同胎牛血清（FBS）浓度（2%、5%、10%）的DMEM/F-12培养基诱导NSCs分化，分别用神经元特异性微管相关蛋白2（MAP-2）抗体、神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白（GFAP）抗体行免疫荧光染色鉴定分化细胞。通过Western blot法检测不同FBS浓度的分化条件下MAP-2与GFAP的表达情况。结果获得大量未分化且悬浮生长的NSCs球，并能分化为神经元和神经胶质细胞。随着血清浓度的增加，各组MAP-2的表达逐渐增加（P＜0.05），GFAP的表达逐渐减少（P＜0.05）。结论应用无血清培养技术可成功在体外培养出具有增殖、自我更新及多潜能分化能力的新生大鼠NSCs，可于含有不同FBS浓度（2%、5%、10%）的分化条件下进一步分化为神经元及神经胶质细胞，含低浓度血清的条件培养基促进NSCs向神经元方向分化，而高浓度血清则有利于NSCs向神经胶质细胞方向分化。

大鼠；神经干细胞；细胞培养；免疫印迹

干细胞是一类可自我复制，同时又具有分化成多种组织细胞潜能的多能细胞。应用干细胞的多向分化潜能，尤其是神经干细胞（neural stem cells，NSCs）这一分布于神经系统的、具有自我更新和多分化潜能的细胞，能生成多种神经细胞，特别是神经元细胞，可有效地修复损伤的脊髓组织，重新建立神经间的连接，治疗脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）。……