色谱法在药物分析中的应用*

2014-02-11马兰

天津药学 2014年1期

关键词：栀子色谱法液相

马兰

(天津市北辰区药品检验所，天津300400)

色谱法在药物分析中的应用*

马兰

(天津市北辰区药品检验所，天津300400)

色谱法是现代化学分析中的重要分析技术，被广泛地应用于环境保护、药物分析、食品安全和生命科学等领域。随着科学技术水平的提高，色谱技术在药物化学分析领域也得到广泛应用，其具有分离效能高、分析速度快、专属性好等特点，用于药品研发、质量控制以及复杂成分的分离分析，联用质谱技术还可用于化学结构的鉴定。随着色谱技术的不断完善，其应用范围也将更加广阔。本文就色谱法在药物分析中的应用做一综述。

色谱法，药物分析，结构鉴定，药品杂质，质谱联用，农药残留量

色谱法是现代化学分析中的重要分析技术，被广泛地应用于环境保护、药物分析、食品安全、生命科学等领域。根据分离方法分为薄层色谱法、气相色谱法、柱色谱法、高效液相色谱法等;根据其分离原理可分为吸附色谱法、分配色谱法、离子交换色谱法等［1］。随着科学技术水平的提高，色谱技术在药物化学分析领域也得到广泛应用，其具有分离效能高，分析速度快、专属性好等特点，用于药品研发、质量控制以及复杂成分的分离分析，联用质谱技术还可用于化学结构的鉴定。本文就色谱法在药物分析中的应用综述如下。

1 对已知化合物进行定性分析及结构鉴定

张萍等［2］采用高效液相色谱法以甲醇－水－醋酸(60∶36∶4)为流动相，测定细辛属及马兜铃属药材中马兜铃酸A的含量，同时采用高效液相色谱－质谱联用法对细辛中马兜铃酸A的结构进行确认。结果马兜铃酸A进样量线性在0.01～0.25 μg范围内，平均回收率为97.5%，色谱图中保留时间为9.036 min色谱峰，以及从质谱图得到的m/z为339的［M－H］峰，确证为马兜铃酸A。袁耀佐等［3］采用液相色谱－质谱联用一级质谱扫描总离子流谱测定精制蒜氨酸中有关物质准分子离子，利用色谱保留时间、二级质谱或对照品进行结构鉴定。结果显示精制蒜氨酸中主要含7个有关物质成分及2个分别鉴定为异蒜氨酸和环蒜氨酸的同分异构体。

娄方明等［4］采用蒸馏法提取厚朴挥发油，以气相色谱－质谱联用技术对挥发油成分进行分离鉴定，并分析比较了不同产地厚朴的挥发油成分。结果显示5种不同产地厚朴所含挥发油的量差别较大，以云南和四川最少，浙江产最多，但是5个地区厚朴所含主要成分基本相同，只是含量有差异，其共有成分达到18种。另有20种成分分别为各产地所独有，但含量甚微，其他的成分则在2种以上产地上存在。

2 对药品质量的控制

中药有效成分的含量高低直接影响到治疗效果，也是评估中药质量的重要标志。樊鹏程等［5］采用高效液相色谱法测定不同产地独一味药材中山栀子苷甲酯的含量，流动相为甲醇－水(25∶75)，流速为1.0 ml/min，检测波长238 nm，测定结果显示山栀子苷甲酯在5～50 μg/ml(r=0.999 8)范围内线性良好，加样回收率为94.7%，RSD为2.8%。测定结果显示，9批不同产地的独一味药材中山栀子苷甲酯的含量差异较大，甘肃玛曲县所产独一味除根以外的部分山栀子苷甲酯的含量较高。李志浩等［6］采用反相高效液相色潽法同时测定神农香菊中绿原酸、木犀草素及蒙花苷含量，流动相为甲醇(A)－乙腈(B)－0.8%磷酸溶液(C)，进行梯度洗脱，结果显示绿原酸、木犀草素和蒙花苷分别在4.5～90.0 μg/ml(r=0.999 3)，10.5～210.0 μg/ml(r=0.999 6)和1.2～12.0 μg/ml(r= 0.999 4)的浓度范围内呈良好线性关系，平均加样回收率分别为98.91%、97.77%和98.30%;RSD均小于2.0%。尚严等［7］建立了毛细管电泳色谱法测定地骨皮中香草酸含量的方法，通过优化实验条件，摸索出最优检测条件，同时揭示出不同产地野生地骨皮与栽培地骨皮中香草酸含量差异较大，总体上栽培地骨皮香草酸含量高于野生地骨皮含量。王伟影等［8］采用高效液相色谱法测定了不同采收时期、不同炮制方法对栀子中有效成分栀子苷含量的影响，结果显示，以10月中下旬采收，采用沸水烫20 s后晒干的方法测得的栀子苷的含量最高，通过试验为采收及炮制提供了科学依据。

周桂荣等［9］采用反离子对色谱法测定肾炎1号片中盐酸益母草碱含量，结果显示，盐酸益母草碱进样量在33.6～672.0 ng范围内线性良好，平均回收率为99.55%(n=9)，RSD为1.78%。该方法可用于对肾炎1号片中盐酸益母草碱的含量控制。陈菊［10］利用离子排斥色谱法测定复方α－酮酸片的含量，实验分别考查了流动相、柱温、检测波长等实验条件，并遴选出最佳实验条件，建立了该制剂可行的检测标准。

张鹰等［11］建立了气相色谱法测定复方氧化锌粉中薄荷脑和樟脑的含量，实验方法以环己烷为溶剂，萘为内标物质，岛津CBP－M25－025(25 m×0.22 mm，0.25 μm)色谱柱，载气为氮气，FID氢火焰离子化检测器，柱温130℃，进样口和检测器温度均为180℃，进样量1μl，结果显示各被测组分达到良好分离，检测方法简便、快速，结果可靠。

刘悦［12］采用凝胶渗透色谱法，采用示差折光检测器对双氯芬酸钠滴眼液中玻璃酸钠进行含量测定，取得了较好的检测效果。

3 对药品非法添加成分的检测

随着人民生活水平的不断提高，中药及保健食品越来越多地用于人们的疾病治疗及日常保健，一些不法商家为了达到产品所宣传的功效或为了牟取暴利，常常在其产品中非法添加化学药物，既损害了消费者的健康，也严重影响着中成药与保健食品产业的良性发展。李涛等［13］采用气相色谱－质谱联用法建立了能够在1 h内快速检测降压类中成药及保健食品中是否非法添加化学药物的方法，并在两批样品中分别检出尼群地平和可乐定。陈安珍等［14］采用超高效液相色谱－串联四极杆质谱技术建立了镇静安神类中药及保健食品中非法添加化学药品的检测方法。胡晓炜［15］利用超高效液相色谱法检测贵重中药西红花中非法添加染料金橙Ⅱ，方法为用超高效液相色谱法分离非法添加的金橙Ⅱ，用离子肼进行定性鉴别，流动相为乙腈－0.01 mol/L醋酸铵溶液(30∶70)，流速0.3 ml/min，检测波长484 nm，离子化模式为ESI+，碰撞能量为30V。结果显示，该方法具有检测时间短、结果可靠等特点。

4 在中草药农药残留量分析中的应用

随着中草药使用量的日益增加，草药种植户为了防治病虫害，提高产量，农药被大量用于种植中，中药材的农药残留问题也日趋严重，对人民的健康带来了安全隐患。戴荣华等［16］建立了分散固相萃取－气相色谱－质谱联用法测定穿山龙中23种农药残留的检测方法，结果显示，该方法基本可以满足农药残留分析的要求。董顺玲等［17］建立了反相高效液相色谱法测定三七、西洋参等药材中农药残留量的方法，为该品种药材提供了一种有效可行的农药残留量检测方法。

5 药品杂质及安全性检查

药品在生产、运输、储存过程中，受各种不利条件的影响，导致药品分解或生成少量的与治疗无关的成分，这些杂质既影响到药品的质量，也可能给肌体带来伤害。大量实验和研究表明，β－内酰胺类抗生素中存在的各类高分子杂质是引起肌体过敏的过敏原［18］。还有一些毒剧药品，其所含成分是治疗疾病的有效成分，但超过一定量又会对肌体构成伤害，所以控制药品中相关杂质及所含成分的限量就显得尤为重要。封淑华等［19］采用薄层色谱法建立了蚁乌风湿膏中毒性成分乌头碱的限量检查。晏菊姣等［20］采用高效凝胶色谱法测定注射用盐酸头孢甲肟中高分子杂质，方法为采用高效凝胶Tsk－gel G2000 SWxl色谱柱，以pH 7.0的0.005 mol/L磷酸盐缓冲液［0.005 mol/L磷酸氢二钠溶液－0.005 mol/L磷酸二氢钠溶液(61∶39)］－乙腈(95∶5)为流动相，流速0.8 ml/min，检测波长234 nm，进样量20 μl，测定结果显示，供试品溶液在0.067～2.700 mg/L浓度范围内，溶液浓度与高分子杂质峰面积总和线性关系良好(r=0.998 8)，结果可靠。还可以利用分子排阻色谱法进行水解蛋白注射液中高分子物质的测定，采用高效液相－蒸发光散射色谱法进行盐酸氨基葡萄糖片中有关物质的测定［21，22］。

6 结语

色谱法作为一种检验技术，在现代药物分析中越来越受到人们的重视，其既可以单独用于药品的质量控制，还可以与质谱仪等仪器联用，从而使其应用范围不断扩大，其所具有的分析快速、专属性强等特点是其他检验技术所不能比拟的。随着科学技术的发展，色谱法将会越来越多地应用于药品检验、研发及质量控制中，为人民的健康保驾护航。

1中国药典［S］.二部.2010:附录78－81

2张萍，冉海琳，肖新月，等.细辛类植物中马兜铃酸A的定性及定量分析［J］.药物分析杂志，2006，26(6):811－814

3袁耀佐，顾洁，杭太俊，等.HPLC－MS/MS法研究精制蒜氨酸中有关物质［J］.药学学报，2007，42(6):639－642

4娄方明，李群芳，邱维维.5种不同产地厚朴挥发油化学成分的GC－MS分析［J］.安徽农业科学，2011，39(7):3934－3937

5樊鹏程，李茂星，贾正平，等.用RP－HPLC法测定不同产地独一味药材中山栀子苷甲酯的含量［J］.药学服务与研究，2010，10(5): 385－387

6李志浩，李鹏，朱雪松，等.反相高效液相色谱法同时测定神农香菊中绿原酸木犀草素和蒙花苷的含量［J］.医药导报，2010，29(4): 527－529

7尚严，崔永霞，李进，等.毛细管电泳色谱法测定地骨皮中香草酸的含量［J］.中国药师，2011，14(6):823－825

8王伟影，范蕾.不同采收时期及干燥方法对栀子中栀子苷含量的影响［J］.中国药师，2012，15(6):811－812

9周桂荣，鄂秀辉，李晴川.反离子对色谱法测定肾炎l号片中盐酸益母草碱的含量［J］.天津药学，2012，24(4):8－10

10陈菊.离子排斥色谱法测定复方α－酮酸片的含量［J］.中国药师，2010，13(10):1481－1483

11张鹰，程璐，胡志强，等.气相色谱法测定复方氧化锌粉中薄荷脑和樟脑含量［J］.中国药师，2011，14(1):82－83

12刘悦.凝胶渗透色谱法测定双氯芬酸钠滴眼液中玻璃酸钠的含量［J］.亚太传统医药，2012，8(6):31－32