国外医学·SCI文摘

miR-221在肝癌组织中的高表达及其在体外促进细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用

RONG Min-hua，CHEN Gang，DANGYi-Wu.
Increased miR-221 expression in hepatocellular carcinoma tissues and its role in enhancing cell growth and inhibiting apoptosis in vitro.BMC Cancer，2013，13（1）：21.

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是常见的恶性肿瘤之一，其发生和发展是一个典型的多阶段过程。研究显示多种基因和蛋白质参与了肝癌的发生和发展过程，然而目前鉴于肝癌相关分子标志物的敏感性和特异性有限，需要筛选新的生物标志物，以了解导致肝癌发生的事件。近年微小RNA（miRNAs）在癌症研究中已深受关视。这些小型的非编码RNA可以抑制靶基因的表达，通过结合目标mRNA 3′-非编码区，导致其降解或抑制其翻译成蛋白。miRNAs在许多生物过程如细胞增殖、分化、凋亡与应激反应中发挥重要作用。研究还表明，miRNA的异常表达与肿瘤发生、发展相关，因此miRNA可作为诊断和判断预后的肿瘤标志物。另一方面，miRNAs可能有致癌或抑癌活性，因此miRNAs正成为新兴的肿瘤分子治疗的靶标。多种不同的miRNAs在HCC或其他癌种中与正常组织相比有差异性表达，但miRNA参与HCC发生和进展的机制仍有待了解。在已报道的HCC相关miRNAs中，与癌旁组织和良性肝组织相比，miR-221在HCC组织中的表达升高，但miR-221在HCC中的表达及其与临床病理参数之间的关系并未完全清楚。

本研究探讨了福尔马林固定石蜡包埋（formalinfixed paraffin-embedded,FFPE）的HCC组织中miR-221过表达与临床病理参数的关系，以及miR-221模拟物和阻遏物在体外对不同HCC细胞系的生物学作用。通过RT-PCR法检测miR-221在76例FFPE的HCC组织和对应癌旁组织中的表达，分析其表达水平与临床病理特征的关系。结果显示miR-221在HCC组织中较癌旁组织的表达高，证实了其他小组之前的研究结果，提示miR-221作为一种类似癌基因的miRNA在HCC发生中起关键作用。miR-221在临床TNM分期中Ⅲ期、Ⅳ期的表达显著高于Ⅰ期、Ⅱ期者，在转移复发组的表达高于无转移复发组，与其他小组的研究报道一致。miR-221的表达水平还与肿瘤包膜浸润状态相关，其在包膜完整或无浸润组中高于无包膜或包膜浸润组，提示miR-221和HCC细胞的迁移、浸润、侵袭和转移相关。miR-221促进癌细胞转移的机制可能涉及多个不同的靶分子。有报道miR-221通过靶向肿瘤抑制基因PTEN和TIMP3，诱导TRAIL抵抗，并通过活化AKT信号通路和金属蛋白酶促进细胞迁移，且多灶性HCC与单灶性HCC相比出现高水平表达的miR-221。此外，有报道肿瘤大小和肝硬化等也与miR-221的表达相关。本研究未发现患者年龄、性别、组织学分级、肝硬化、血清AFP水平、门静脉癌栓、肿瘤结节数、肿瘤大小或微血管侵犯等临床病理参数与miR-221的表达有关。本研究对76例患者中的48例进行随访，复发时间平均为（28.94±3.20）周。miR-221高表达的患者（高于平均水平）比低表达的患者，其复发时间更短［（24.15±3.11）周 vs（33.73±5.48）周］，差异无统计学意义，但miR-221高表达可能导致HCC复发。因此，检测miR-221的表达可能对预测HCC转移具有临床价值。

进一步进行体外实验，用combiMAGnetofection介导转染miR-221阻遏物和模拟物至不同的HCC细胞系（HepB3、HepG2、SNU449），细胞的生长由3个独立的实验进行分析：CellTiter 96 AQueous细胞增殖检测试剂盒、CellTiter-Blue细胞活力检测、Hoechst33342荧光/PI双染色。miR-221阻遏物作用于3个HCC细胞系均观察到细胞增殖受抑制。相比之下，经miR-221模拟物作用后，仅HepB3和HepG2细胞促进细胞增殖，但是与阴性对照相比差异较小。HepB3细胞转染miR-221模拟物96 h后，经流式细胞仪检测发现S期细胞的数量增加1.8倍，证实了miR-221促进HCC细胞增殖的特性。miR-221阻遏物促使HCC细胞系HepB3和HepG2细胞凋亡显著增加，这与Gramantieri等的研究结果一致。然而，即使将miR-221模拟物增加至300 nmol/L，也没有减少HCC细胞凋亡，表明在这些细胞系中已达到单个miRNA模拟物的饱和阈值。为了验证细胞凋亡的数据，我们进一步检测caspase-3/7的活性，结果caspase-3/7的活性检测结果与细胞凋亡一致。提示miR-221可以抑制HCC细胞的凋亡。

结合文献报道，本研究结果证实了miR-221是一个原癌miRNA，通过多途径对HCC的发生、发展起重要作用。HCC石蜡包埋组织或血清中miR-221的表达有望作为判断HCC预后的标志物。另一方面，miR-221阻遏物抑制细胞生长和诱导凋亡的作用提示其可用于治疗HCC的可能性。图12参62表1。

［容敏华 党裔武△摘译 陈 罡△审校 530021南宁 广西医科大学附属肿瘤医院实验研究部；△广西医科大学第一附属医院病理科］

［2014-02-04收稿］［编辑 罗惠予］

R735.7

1674-5671（2014）01-02

10.3969/j.issn.1674-5671.2014.01.27