刘进平，何永吉，王 兰

河南华溪蟹金属硫蛋白分泌型表达载体的构建、表达及纯化

刘进平，何永吉，王 兰*

（山西大学生命科学学院，山西 太原 030006）

目的：构建河南华溪蟹金属硫蛋白（metallothionein，MT）分泌型表达载体并诱导其可溶表达。方法：采用基因重 组技术，将河南华溪蟹MT基因亚克隆至碱性磷酸盐启动子（alkaline phosphatase promoter，phoA）分泌型原核表达载体，转化大肠杆菌BL21（DE3），通过低磷酸盐诱导重组蛋白表达，经Ni2+螯合柱分离纯化后，利用紫外光谱扫描分析、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）及Western blotting检测鉴定重组MT。结果：phoA-MT分泌型表达载体构建成功，工程菌经 低磷酸盐诱导后重组MT以可溶形式获得表达，紫外光谱扫描和Western blotting证实表达产物的正确性，SDS-PAGE分析其纯度较高，主要以单体和二聚体的形式存在，其分子质量分别约为7.5、15 kD。结论：成功实现了河南华溪蟹MT的重组表达。

河南华溪蟹；金属硫蛋白；表达

金属硫蛋白（metallothionein，MT）是一类分布广泛，分子质量较小（6 000～7 000 D），富含半胱氨酸，无芳香族氨基酸和组氨酸，能结合Cd、Cu、Zn等多种金属离子的非酶类蛋白质[1-3]。1957年哈佛大学的Margoshes等[4]首次从马肾中分离出这种蛋白质并为其命名。研究表明，MT具有重金属解毒、平衡体内必需金属元素、清除自由基以及延缓 衰老、抗肿瘤等作用[5-6]，是一种重要的药用蛋白资源[7]。现有的金属 硫蛋白主要通过哺乳动物肝脏提取[8]，产量低、成本高、工艺复杂[9]。也有报道从酵母菌、脉孢菌、虫草菌中提取，但同样受制于表达水平较低，难以获得理想的收率[10]。随着生物技术的发展，利用蛋白质工程技术实现重组MT的规模化制备成为一种可能。……