■ 邢思华 华雪铭朱站英， 黄 卫 沈彦萍沈文婧

(1.上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室，上海201306；2.泗洪县水产技术推广站泗洪县水生动物疫病预防控制中心，江苏宿迁223900；3.杭州海皇饲料开发有限公司，浙江杭州311100；4.上海沈李科工贸有限公司，上海200436)

作为国际公认的绿色天然酶制剂[1-2]，溶菌酶具有无毒[3]、无害、专一性强[4]的特点，并已经广泛应用于医疗[5]、食品[6]等行业。相关研究表明，溶菌酶在饲料行业也有着广阔的应用前景，在部分水产动物饲料中使用[7-8]已取得良好的效果。然而针对水产动物复杂的营养生理特性[9-12]，渔用饲料高温高压的加工工艺特点以及酶制剂易失活的特性[13-14]，饲用溶菌酶在水产饲料中的可行性、稳定性和真实有效性还有待进一步验证。研究采用人工模拟环境因子的方法探讨溶菌酶酶活力受温度、pH值等因素的影响，评价溶菌酶制品的储存效果，并通过体外消解法探讨溶菌酶制品对鱼体内源性消化酶的耐受性，为溶菌酶制品的改良及其在水产饲料中的应用提供参考。

1 材料和方法

溶菌酶制品为粉状脂质体，采用薄膜法制备而成。

1.1 溶菌酶制品活性随储存时间、温度和pH值的变化

将溶菌酶制品分装在自封袋中，放入干燥器，室温14～26℃保存。保存至60 d和90 d时在pH值7.2、37℃条件下分别测定溶菌酶活力。

以储存至60 d的溶菌酶制品为试验材料，在37℃及不同pH值（3.0、4.0、5.0、6.0、7.0与8.0[15]）条件下测定溶菌酶活力。将溶壁微球菌接种于营养琼脂培养基，30℃培养48 h，用上述不同pH值的PBS冲洗菌落[16]，转移至离心管，3 000 r/min离心1 min，弃上清液后，再用相应的PBS重新混匀溶壁微球菌，使悬浊液的透光度在0.4左右；……