转染NY-ESO-1特异性TCR增强人PBMC对NY-ESO-1阳性肿瘤细胞的特异性细胞毒性

2013-12-07郭佳，田洲，顾娜，徐珩，闾军*

基础医学与临床 2013年3期

关键词：检测

郭佳，田洲，顾娜，徐珩，闾军*

(1.首都医科大学附属北京佑安医院肝病与肿瘤生物治疗科，北京100069;2.安徽医科大学基础医学院，安徽合肥230032)

众所周知，绝大多数肿瘤相关抗原(Tumor-associated Antigen，TAA)是自身抗原。因为胸腺的选择机制和耐受机制，机体针对这些抗原产生的大多数TCR(T Cell Receptor，TCR)亲和力较低，限制了对肿瘤细胞的识别及杀伤效果。所以，对肿瘤抗原的识别可能是肿瘤免疫研究领域面临的最大挑战［1］。近年来基于TCR基因转导的过继性免疫治疗在众多肿瘤免疫治疗途径中逐渐引起关注［2］。NY-ESO-1抗原属于癌-睾丸抗原(Cancer-testis Antigens，CTA)家族，抗原性强，在多种肿瘤组织表达［3］，但正常组织中仅睾丸组织表达。睾丸组织不表达MHCⅠ类及Ⅱ类分子，所以不会被T细胞识别杀伤［4］。

本实验室已构建HLA-A2限制性NY-ESO-1特异性TCR质粒-pCDNA3.1-ESO-TCR。本研究尝试将该质粒电转到HLA-A2+正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中，观察特异性TCR在细胞表面表达情况，并检测电转后PBMC的体外特异性细胞毒性作用。

1 材料与方法

1.1 试剂与细胞

1.1.1 试剂及多肽:pCDNA-3.1-ESO-TCR质粒(本实验室构建)、无内毒素大提质粒试剂盒(天根试剂有限公司)、IMSF100无血清培养基(Immunotech UK Ltd)、Ficoll淋巴细胞分离液(Norway公司)、1640细胞培养基(北京钮因公司)、Recombinant Human IL-2(Peprotech公司)、OKT3(Biolengd公司)和 Human IFN-γELISPOT Kit(U-Cytech公司)等;NY-ESO-1b多肽(-SLLMWITQC-)和flu多肽(-GILGFVFTL-)(均由北京赛百盛公司合成)。

1.1.2 细胞:经供者本人知情同意，由正常人外周血中分离获得PBMC;NY-ESO-1阳性HepG2细胞、NYESO-1阴性HepG2细胞和T2细胞(均本实验室保存)。