谌海兰，王 鹏，黄美容，胥文春

(1.重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆400016;2.河南省人民医院核医学科，河南郑州450003;3.遵义医学院附属医院输血科，贵州遵义563003)

丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)是一种以磷酸吡哆醛为辅基的酶，其在体内可逆地催化L-丙氨酸和α-戊二酸转化为L-谷氨酸和L-丙酮酸，通过调节这4类物质的量而在糖与氨基酸的相互转化过程中发挥重要作用。由于ALT在肝脏中的含量较血清中高1 000倍以上，因此肝脏损伤时血中ALT水平增高显著，是目前临床评价肝脏功能最灵敏的一个指标。近年来发现ALT有3种同功酶，ALT1、ALT2 和 ALT2-2［1］。ALT1 与 ALT2 有共同催化活性，而ALT2-2未发现有催化活性［2］。ALT1主要分布于肝、肾和骨骼肌中;ALT2主要分布在骨骼肌和心肌细胞中，而在肝脏和肾脏组织中未见表达［3］，因此血清中ALT1水平比总ALT能更特异的反映肝脏功能状态［4-7］。但由于ALT1和ALT2有共同催化活性，所以很难用酶法将二者分别测定，而ALT属于蛋白质，因此首选检测方法是免疫学法［8］。

生物信息学分析［9］发现，ALT1的N端1～115个氨基酸序列含有免疫原性较高的两个抗原表位，这115个氨基酸序列与ALT2及ALT2-2全长相似性75%左右，但在生物信息学分析具有较强免疫原性的2段表位序列，与ALT2及ALT2-2均不存在同源性。因此本实验拟通过原核表达系统制备含ALT1 N端1～115个氨基酸序列的ALT1截短蛋白并制备其多克隆抗体，为ALT1免疫学体外诊断试剂的研发提供原料，为肝脏疾病的诊断和鉴别诊断提供了依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂:DNA纯化试剂盒、HindⅢ、NdeⅠ、DNA聚合酶、连接酶(Takara公司);DNA胶回收试剂盒(Invitrogen公司);质粒提取试剂盒(Omiga公司);弗氏佐剂(Sigma公司);其他试剂均为分析纯;实验用水为Millipore纯净水。……