陈 蕊， 刘培晶， 严金川△， 顾雨春

(1江苏大学附属医院心内科，江苏镇江212001;2北京大学分子医学研究所，北京100871)

肺动脉高压是一种以肺循环阻力和肺动脉压进行性增加为特征的疾病，其发病率、致残率和病死率都很高。K+通道在调节肺血管张力、肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells，PASMCs)静息膜电位、增殖凋亡及肺血管重构时发挥重要作用。PASMCs上主要存在5类钾离子通道，包括钙激活性钾离子通道(calcium-activated potassium channel，KCa)、电压门控型钾离子通道 (voltage-dependent potassium channel，KV)、内向整流性钾离子通道(inward rectifier potassium channel，KIR)、ATP 敏感性钾离子通道(ATP-sensitive potassium channel，KATP)和双孔钾通道(two-pore-domain potassium channel，K2P)［1］。大电导钙激活性钾通道(large-conductance calcium-activated potassium channel，BKCa)是 KCa的一种亚型，广泛分布于各类动脉平滑肌细胞上，对血管舒张起重要调节作用。

ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acid，ω-3 PUFA)能通过减少缺氧性肺动脉高压模型中肺血管肌化、抑制肺纤维化等途径实现抗肺动脉高压的作用［2］。ω-3 PUFA主要包括二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)和二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid，EPA)。目前研究发现，DHA对心肌细胞及冠状动脉平滑肌细胞上多类离子通道有作用，但其对PASMCs上离子通道的影响尚不明确。本研究采用膜片钳技术观察DHA对Sprague-Dawley大鼠PASMCs上BKCa的影响，探讨DHA抗肺动脉高压的离子机制。

材料和方法

1 动物和器材

清洁级Sprague-Dawley大鼠，体质量(180±30)g，雌雄不拘，由江苏大学动物中心提供。Multiclamp 700B膜片钳放大器(Axon)，DigiData 1322型数/模(或模/数)转换器(Axon)，pClamp 10．2 脉冲发放和数据采集软件(Axon)。C1SI激光扫描共聚焦显微镜(Nikon)。

2 试剂及溶液

DHA(Sigma)使用前以无水乙醇配制成10 mmol/L的母液，分装避光保存于－20℃备用。使用时无水乙醇的终浓度＜0．4%，以防止无水乙醇对离子通道的影响。分离血管用生理盐溶液(PSS)成份(mmol/L):NaCl 130，KCl 5，MgCl21．2，CaCl21．5，HEPES 10，葡萄糖10。……