杨改琴 高小利 梁东升 白冰超 陕西省中医医院针灸科（西安710003）

膝关节骨性关节炎 （Osteoarthritis of knee，KOA），是指由于膝关节软骨完整性破坏以及膝关节边缘软骨下骨板病变，导致膝关节症状和体征的一组异质性疾病。陈氏［1］研究表明，以骨内血液循环障碍为特征所导致的骨内高压是形成膝关节骨性关节炎的重要因素，能引起该病一系列临床症状，主要表现为反复发作性关节疼痛、关节僵硬、绞锁、功能障碍。KOA的治疗目的是缓解疼痛、改善关节功能和提高患者生存质量，尽可能避免治疗的毒副作用的发生。因此寻找一种临床疗效确切，毒副作用小的治疗手段很有必要。刺血疗法是中国传统疗法之一，刺血疗法是用三棱针刺破浅表血络或俞穴，根据不同病情，放出适量的血液，通过调气血，通经活络以治疗疾病。属活血化瘀的范畴，源于砭刺，古称为“启脉”、“刺络”，作为一种古老的临床技法，在临床上常常是立起沉疴，顿消痼疾，在我国绵延数千年而不衰。我们临床中应用放血疗法，治疗KOA均取得了不错的疗效，为进一步研究其治病机理，立项本实验，研究“刺络放血疗法”对家兔KOA模型的可能治疗机制。

1 实验材料 1.1 实验动物 同批、同饲养条件6月龄未孕雌性新西兰大白兔36只，雌雄性各18只，共36只，体重1.8～2.5kg，由西安交大医学院实验动物中心提供。批号：医动字第sky08－001号。

1.2 药品与试剂 速眠新Ⅱ注射液合剂，用法用量：速眠新Ⅱ注射液每支1.5mL，可肌肉注射或静脉给药，但静脉给药剂量应为肌肉注射量的1／2～1／3。本品肌肉注射剂量按体重计算：兔每千克0.2mL～0.3mL。生产厂家：中国云南昆明市盘龙制药厂。青霉素 （国药准字H23021439）。英太青（双氯芬酸纳凝胶，国药准字H10950169）。碘伏溶液，75%酒精。

1.3 主要仪器设备 国产ZHY－III型液压测定仪、Sharp电脑自动扫描仪；SA－600型全自动血流变分析仪 （北京赛科希德公司产）；日本SYSMEX－3000型全自动五分类血细胞分析仪。

2 方 法 2.1 分组 同批、同饲养条件6月龄新西兰大白兔36只，雌雄各半，适应性喂养一周后，分别标记称重，按组间均衡一致的原则，随机分为4组，空白组（A组，n＝9）、模型组（B组，n＝9）、刺血组（C组，n＝9）、药物组（D组，n＝9）。

2.2 模型制备 2.2.1造模原理：采用手术结扎右后肢股静脉、臀下静脉，阻断实验侧部分下肢静脉回流结合膝关节制动（自制塑料管固定膝关节），造成动物体内血流动力学异常，致骨内压升高，形成实验兔膝骨关节退行性变动物模型。

2.2.2 造模方法：除空白组外，各组实验兔用20%的速眠新Ⅱ注射液合剂溶液按体重0.3mL／kg作兔耳缘静脉内注射麻醉，生效后将［2］兔子仰卧固定于手术台上，双髋关节外展稍屈曲、双膝关节屈曲30°，于右腹股沟处作1cm纵行切口，分离出股静脉，紧靠腹股沟韧带处结扎，再于右侧髋关节大转子后约1.0cm处为中点，上下直切口3.0cm，分离髂内静脉属支臀下静脉，并予以结扎，术口包扎后，右下肢以自制管形塑料管膝关节模型将膝关节固定于伸直位，以限制膝关节活动，左下肢不固定。按组放入笼中自由活动。术后每天肌肉注射青霉素20万单位，连续7天，以预防感染。

2.3 动物分组及处理方法 造模10周后全部实验兔于左膝关节周围脱毛处理，以便于治疗及观察。

2.3.1 空白组、模型组正常饲养，不作任何处理。

2.3.2 刺血组、药物组，分组每天予以不同治疗。刺血组：在实验兔的膝关节周围寻找迂曲线状丝络或呈蚯蚓状脉络的瘀滞浅表静脉，选好欲刺血部位，然后在欲刺部位的近心端，用绷带或橡皮管绑住，之后先用2%碘酒消毒皮肤、再用75%酒精脱碘，戴一次性无菌乳胶手套，左手拇指按压在欲刺部位的下端，右手拇指、食指、中指持针（5号注射用针头），对准表浅静脉瘀曲处，直刺后迅速退出，即刺破血管前壁，让血液顺势流出，把绷带或橡皮管松绑，直到血流自行停止，使针口附近积血尽出（总出血量约1mL～2mL）。针眼再用2%碘酒消毒，最后用透气胶布封住针眼。2次／周，共治疗8周。

药物组：将英太青（双氯芬酸纳凝胶）研末至粉状，加乳化剂调至混悬液，以9.8mg／kg给实验兔灌服，将治疗时间亦定为8周。

本实验采用手术结扎右下肢股静脉、臀下静脉，阻断实验侧部分下肢静脉回流结合膝关节制动建立KOA模型，因此，造模过程对个人操作技术及实验室环境要求较高，造模难度较大，动物死亡率较高（文献报道死亡率20%左右）。因此，我们已前期进行了预实验，以探索实验条件，熟练实验操作技术，提高造模成功率。造模过程中严格无菌操作，术后注射青霉素钠注射液，预防感染。

3 标本采集 8周后，全部实验兔于禁食不禁水24h后，以20%的速眠新Ⅱ注射液合剂溶液按体重0.3mL／kg作耳缘静脉麻醉，然后将兔仰卧固定于兔台上，右侧膝关节周围剃毛，以碘伏消毒皮肤后首先测骨内压，随后从耳中动脉抽取血做血常规、血液流变学检测。

4 检测指标 4.1 测定方法 采用美国产的电磁血流量计检测骨内压，随机抽检5～6只动物，以骨内压达到18～20mmHg为建模成功。

4.2 统计学方法 所实验数据收集整理后应用SPSS16.0统计软件进行T检验统计分析，实验数据用（±s）形式表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05有统计学意义，P＜0.01有显著统计学意义。

5 结 果 5.1 刺血疗法及药物治疗刺血疗法及药物治疗血常规的影响 试验结束时，从家兔耳中动脉取血1mL用日本SYSMEX－3000型全自动五分类血细胞分析仪做血常规检测，结果见表1。

表1 刺血疗法及药物治疗对血常规的影响

表1可见模型组、药物组WBC均高于对照组，虽有统计学意义，但这是由于手术损伤引起，刺血组WBC和对照组相比无差异，说明刺络放血疗法有助于改善动物手术损伤引起的炎症反应；表1结果说明该造模方法及刺络放血疗法能显著降低家兔血液中的白细胞数量，对家兔血常规中红细胞及血红蛋白无影响。

5.2 刺血疗法及药物治疗对KOA模型家兔对血液流变学的影响 取血5mL新鲜血液注入肝素抗凝试管中，采用全自动清洗旋转式黏度分析计测定全血高切黏度、全血低切黏度、红细胞聚集指数、红细胞压积和血浆黏度，结果见表2。

表2 刺血疗法及药物治疗对KOA模型家兔对血液流变学的影响

从表2中可以看出模型组动物血液流变学各项指标与空白组相比均有所升高；刺血组与模型组比较各项指标都显著降低（P＜0.01），说明刺络放血疗法有助于改善骨内压升高（详见后续论文）及骨关节退行性改变所引起的血液流变学改变。

6 讨 论 本实验采用家兔为研究对象，观测记录了血常规及血液流变学的变化。文献报道膝关节骨性关节炎属于我国传统医学记载的“痹症”、“骨痹”等范畴，《内经》曰：“病在骨，骨重不可举，骨髓酸痛，寒气至，名曰骨痹。”刺血疗法是针灸治疗中广泛使用的一种针刺方法，《素问·血气形志》篇说“凡治病必先去其血。”“久痹不去身者，视其血络，尽出其血。《灵枢·寿夭刚柔》”。应用的原则是“宛陈则除之”（灵枢·九针十二原》）。放血的方法是“络刺者，刺小络之血脉也”，“赞刺者，直出直入，数发针而浅之出血”，通过刺血疗法达到疏通经络，促进血液循环，使气血通畅的目的。血液流变学是一门研究血液及其组成成分流动变形规律的科学。生命的维持与血液流动时分不开的，机体正常机能活动和防御功能都必须有正常的血液流变状态［3］。现代研究表明［4］，祖国医学血瘀证的实质是血液处于浓、粘、聚、凝的“高凝状态”，从而使全身或局部血液循环和微循环发生障碍，而产生一系列疾病，这就是血瘀证产生的病理基础。1982年中国中西医结合研究会活血化瘀专业委员会成立时，血液流变学成为活血化瘀临床与基础研究中的重要指标，血液流变学正式列入血瘀证诊断标准的客观指标，并可作为反应各种活血化瘀药物等治疗作用，改善血液循环障碍，增加血液流量的一个评定标准［4］。

国外学者认为膝关节骨性关节炎的主要病因［5］，在于蛋白多糖的合成紊乱和胶原构架组织的分解，提出两个主要因素，一是骨内高压，另一个就是机械作用方面：主要为骨小梁微细骨折愈合，致使软骨下股质变硬，致关节软骨进行性损害。骨内静脉瘀滞是形成骨内高压的主要因素，而骨内微循环的病理改变是引起骨内高压持续存在的主要的原因。胡氏等［5］以中医肾虚理论为纲，现代基础研究为体，解释膝骨性关节炎的发病机制：也认为血液循环障碍最为重要。有医学研究发现刺血疗法是通过神经体液的调节作用，改善微循环及血管功能，改变血液成份，排除血中有毒有害的物质，促进人体新陈代谢，提高机体的免疫功能，刺激骨髓的造血功能，使循环中的年幼红细胞增加，代谢活性旺盛。所以，刺血疗法降低骨内高压是通过改善骨内高压下微循环病理状态这一本质，阻断了骨内高压形成的恶性循环路径，从而介入KOA的病理发展过程。为刺血疗法在治疗膝关节骨性关节炎时对血液流变学的影响提供了最初的理论依据。本研究者［7］采用刺络放血疗法，取病变膝关节处瘀曲的血络治疗膝骨关节炎，刺出血20～30mL，总有效率为97.2%。以上资料均证明刺络放血治疗KOA有效可行。

从本立项实验研究结果容易看出刺血法能显著降低血液中的白细胞数量，说明刺络放血对病变机体局部的炎性物质有良性刺激作用，同时说明每天放血1～2mL不足以引起机体失血反应，血中红细胞及血红蛋白并没有受到影响。另外通过对血液流变学各项指标的观测发现，血液流变学中的全血高切黏度、全血低切黏度、红细胞聚集指数、红细胞压积和血浆黏度五项指标在治疗前后均有显著性差异。进而说明刺血疗法治疗KOA模型家兔的机理，主要是改善了KOA模型家兔临床症状与血液中的异常指标，具有降低病变机体的炎性细胞，改善血液微循环的障碍，起到活血化瘀、通络止痛的作用。由此可知临床上刺血疗法是通过KOA患者机体的改善机体的血液循环，进一步消除局部的炎性细胞，改善或解除血液高粘滞状态，取得了治疗膝骨性关节炎的良好疗效。这也丰富了刺血疗法治疗膝关节骨性关节炎的机理，并为临床推广提供了依据。

［1］陈 群.骨性关节炎发病机制的研究进展［J］.福建中医药，2002，33（6）：50.

［2］许学猛，王羽丰，邓晋丰，等.补肾活血胶囊影响兔膝关节退变性疾病骨内压化的实验研究［J］.中国中医骨伤科，2001，9（4）：24－27.

［3］黄迪君，骆永珍，周志昆，等.灸刺法对实验性RA大鼠血液流变学的影响［J］.成都中医药，1996，5：41－43.

［4］姜春华.活血化瘀研究新编［M］.上海.上海医科大出版社，1990：31.

［5］王新于.综合刺血疗法治疗膝骨性关节炎的临床研究［D］.广州中医药，2007：10.

［6］胡劲松，曾一林.退行性膝关节炎的发病机理研究［J］.中医正骨，1999，11（12）：49－50.

［7］杨改琴，黄丽萍，苏同生，等.刺血疗法治疗膝骨关节炎106例［J］.陕西中医，2010，31（7）：887.