潘晓娜， 方志刚， 龙梓洁， 陈家杰， 刘玲玲， 范蕊芳， 林东军

(中山大学附属第三医院血液科，中山大学血液病研究所，广东 广州 510630)

上调c-myc基因的表达对U937白血病细胞的影响

潘晓娜▲， 方志刚▲， 龙梓洁， 陈家杰， 刘玲玲， 范蕊芳， 林东军△

(中山大学附属第三医院血液科，中山大学血液病研究所，广东 广州 510630)

目的构建稳定表达外源c-myc基因的人单核细胞白血病细胞株U937，并初步分析其特性。方法首先构建重组质粒MSCV-c-myc-IRES-GFP (MMIG)载体，分别用MMIG及空载体MSCV-IRES-GFP(MIG)包装病毒，并感染U937细胞，用流式细胞术分选绿色荧光细胞，获得 U937/GFP和U937/MYC细胞，用荧光显微镜及流式细胞术检测GFP阳性率，用Western blotting测定细胞中c-Myc、survivin、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和Bcl-2的蛋白表达水平，流式细胞术检测U937/GFP和U937/MYC细胞周期，并用MTT法测定U937/GFP和U937/MYC细胞的生长情况，克隆形成实验检测克隆形成能力。结果荧光显微镜观察，MIG和MMIG病毒感染后，2种细胞均表达绿色荧光蛋白；流式细胞术结果显示，MIG病毒感染的细胞荧光率为26.0%，MMIG病毒感染的细胞荧光率为27.7%；Western blotting的结果显示，c-Myc蛋白在MMIG病毒感染的细胞中表达水平升高。流式细胞术分选后，荧光显微镜观察可见绿色荧光蛋白表达明显增多，U937/GFP和U937/MYC细胞绿色荧光蛋白表达率分别达98.7%和93.7%。 U937/MYC细胞中c-Myc蛋白表达较U937/GFP细胞显著升高，c-Myc蛋白下游的survivin表达增多，而凋亡相关蛋白XIAP及Bcl-2的表达则没有明显变化。细胞周期检测显示，U937/MYC细胞处于S期的细胞数增多。MTT实验结果显示，U937/MYC细胞的生长速率较U937/GFP细胞增快。U937/MYC细胞的克隆形成能力较U937/GFP细胞强。结论成功构建了c-myc基因高表达的U937稳定细胞株U937/MYC。……