奥拉西坦注射液细菌内毒素检测方法的研究

2013-10-19江苏省泰州市食品药品检验所225300姜爱芳

首都食品与医药 2013年12期

江苏省泰州市食品药品检验所（225300）姜爱芳

奥拉西坦为吡拉西坦的类似物，可促进磷酰胆碱和磷酰乙醇胺合成，提高大脑中ATP/ADP的比值，使大脑中蛋白质和核酸的合成增加。适用于脑损伤及其引起的神经功能缺失、记忆与智能障碍等症的治疗。国家药品标准[1]中对其采用家兔热原检查法，鉴于鲎试剂用于细菌内毒素的检测具有灵敏度高、操作简便的特点，笔者参照《中国药典》2010年版细菌内毒素检查法[2]和相关文献[3][4][5]，对奥拉西坦注射液进行了细菌内毒素的检测试验，现将结果总结分析如下。

1 实验材料

鲎试剂（以下简称TAL）[批号：1206190，标示灵敏度（λ）0.25EU/mL，0.1mL/支，10支/盒（湛江博康海洋生物有限公司）；批号：1207141，标示灵敏度（λ）0.25EU/mL，0.1mL/支，10支/盒（湛江安度斯生物有限公司）]；细菌内毒素检查用水（以下简称BET水）[批号：2010-1，10mL/支，10支/盒（中国药品生物制品检定所）]；细菌内毒素工作标准品（以下简称WSE）[批号：150601-201174，效价160EU/支，中国药品生物制品检定所]；奥拉西坦注射液注射液[批号：111017B、120522B，规格5mL∶1g，哈尔滨三联药业有限公司]。

附表1 鲎试剂灵敏度复核

附表2 奥拉西坦注射液的干扰试验预试验结果

附表3 奥拉西坦注射液注射液的干扰试验结果

附表4 2个批号注奥拉西坦注射液细菌内毒素检查结果

仪器设备：ET-96内毒素凝胶法测定仪（天津市天大天发科技有限公司）；XW-80A旋涡混合器（上海医大仪器厂）；微量移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司），吸管，毛细管等均经除热原处理。

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度复核按照《中国药典》2010年版二部附录XIE“细菌内毒素检查法”规定，进行鲎试剂的标示灵敏度复核，结果见附表1。

两批鲎试剂经用细菌内毒素工作标准品检查λc在0.5λ～2.0λ（包括0.5λ和2.0λ）之间，结果均符合规定。

2.2 细菌内毒素理论限值（L）的确定细菌内毒素计算公式：L＝K/M。本品为注射剂，K＝5EU•kg-1•h-1。M为6000/60＝100mg•kg-1•h-1（根据产品说明书：每日1次，每次4～6g）。限值L＝5/100＝0.05EU/mg。根据细菌内毒素检查法建立的指导原则[6]，可将计算值适当调整，严格至计算限值的1/2或1/3，最终确定限值为0.02EU/mg。

2.3 干扰试验预试验奥拉西坦注射液最小有效稀释浓度（MVC）的计算公式：MVC＝λ/L，其中L为奥拉西坦注射液的细菌内毒素限值0.02EU/mg，λ为鲎试剂标示灵敏度。目前，市售鲎试剂灵敏度λ通常在0.5～0.03EU/mL。则奥拉西坦注射液的对应最小有效稀释浓度为25mg/mL；12.5mg/mL；6.25mg/mL；3.12mg/mL；1.5m/mL。

将奥拉西坦注射液用BET水分别稀释成浓度为100mg/mL；50mg/mL；25mg/mL；12.5mg/mL；6.25mg/mL；3.12mg/mL；1.5mg/mL的溶液，将此系列浓度溶液标记为NPC。同时，在上述试验液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的试验溶液中均含有2λ浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为PPC。取灵敏度为0.25EU/mL的两个不同厂家的鲎试剂，分别与上述NPC和PPC进行反应。每一浓度设2管，同时设阴性（NC）和阳性（PC）对照管，混匀后封口，置37 ℃恒温水浴60min，做干扰试验的预实验，结果见附表2。

从附表2结果可以看出，由以上干扰预试验结果可以初步了解：两个厂家鲎试剂对奥拉西坦注射液的细菌内毒素试验结果在12.5mg/mL及以下浓度时均无干扰作用。

2.4 供试品干扰试验[7]用BET水将2批奥拉西坦注射液配成12.5mg/mL的溶液，用该浓度溶液和BET水分别将WSE稀释成含内毒素0.5、0.25、0.125、0.06EU/mL的溶液，然后步骤进行干扰试验，结果见附表3。正式干扰试验结果表明：Es在0.5λ～2λ（包括0.5λ和2.0λ）时， 2个批号含12.5mg/mL供试品的Et值均在0.5Es～2Es（包括0.5Es和2Es）范围之间，确认供试品在该浓度下无干扰作用。

2.5 供试品细菌内毒素检查将2批样品分别用BET水稀释成12.5mg/mL的溶液，用此浓度将细菌内毒素工作标准品稀释为2.0λ浓度的溶液，作为供试品阳性对照，用λ为0.25EU/mL的鲎试剂进行细菌内毒素检测，结果见附表4。