王文娟，武晓宁，贾玉洁，谷 成，闵连秋△

（1.辽宁医学院研究生学院，辽宁锦州 121000；2.辽宁医学院附属第一医院神经内科，辽宁锦州 121001）

近些年来，糖尿病合并脑梗死的发病率逐年升高，给人们的健康带来了严重的威胁。糖尿病已经被认为是脑梗死的独立危险因素，能加重神经细胞的凋亡，增加了脑梗死的致残率和病死率，严重地影响了患者预后的生活质量。有关糖尿病加重脑梗死的机制近年来研究较多，但具体机制至今尚未明确［1］。本实验旨在探讨大鼠局灶性脑缺血早期Ras／Raf／丝裂原激活蛋白激酶（mitogenactivatedp rotein kinase kinase，MEK）／细胞外信号调节激酶（extracellular signal－regulated kinase，ERK）信号传导通路的作用，以及糖尿病加重脑梗死与Ras／Raf／MEK／ERK传导通路的关系。

1 材料与方法

1.1 材料 选取健康的雄性SD大鼠，体质量280～330g，由辽宁医学院动物实验中心提供，合格证号［SCXK（辽）2003－0007］。PD98059 由 德 国 默 克 公 司 提 供 （批 号 51300I）；p－ERK1／2一抗、二抗均由北京博奥森生物有限公司提供，末端脱氧核苷酸转移酶接到的dUTP原位切口末端标记（TUNEL）试剂盒购于南京凯基公司。

1.2 方法

1.2.1 2型糖尿病（T2DM）大鼠脑缺血模型的建立 取SD大鼠常规饲料适应性饲养1周，然后喂饲高脂高糖饲料（10%猪油，2.5%胆固醇，1.0%猪胆酸盐，20.0%糖，66.5%常规饲料［2］）。4周后，按25.0mg／kg［3］体质量的剂量一次性尾静脉注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）溶液。72h后取尾血测血糖，血糖超过16.7mg／kg为T2DM大鼠［4］。选取T2DM造模成功的SD大鼠，按照文献［5］制作大鼠大脑中动脉缺血模型（middle cerebral artery occlusion，MCAO）。麻醉后的SD大鼠颈部正中切口，暴露并钝性游离左侧颈总动脉（common carotid artery，CCA），结扎同侧CCA近心端和颈外动脉（external carotid artery，ECA）分叉部，距CCA末端约5mm处剪口，选用头端烧成光滑杵状的国产尼龙线（直径0.235mm，长6 cm）插入，以颈总动脉分叉处计算进线深度为（18.0±0.5）mm，至大脑中动脉起始部以完全阻断血供。……