宋庆亮，郭 银，周 蕾，赵秀军，牛嗣云△

(1.河北大学基础医学院，河北保定 071000;2.河北医科大学)

随着人类预期寿命的延长，迟发性性腺功能减退症(late-onset hypogonadism,LOH)成为人们关注的热点[1]。LOH也称为中老年男性雄激素部分缺乏综合征(partial androgen deficiency of the aging male,PADAM)，是一种随老龄化血浆睾酮水平相对下降出现的一组临床综合征，主要表现是性功能障碍、情绪变化、睡眠欠佳、机体肌肉含量下降、疲乏、骨矿物质减少等[1-2]。机体内睾酮90%由睾丸Leydig细胞分泌。本研究采用H2O2和FeSO4损伤原代SD大鼠Leydig细胞建立Leydig细胞衰老模型，探讨何首乌饮对大鼠Leydig细胞衰老模型β-半乳糖苷酶表达的调节作用。

1 材料与方法

1.1 试剂 DMEM/F12(GIBCO)、胎牛血清，北京四季青生物试剂公司;β-半乳糖苷酶试剂盒，北京鼎国生物技术发展中心;胶原酶Ⅰ，美国Sigma公司。

1.2 何首乌饮含药血清的制备 何首乌饮方剂由何首乌、肉苁蓉、怀牛膝、淫羊霍、丹参、茯苓组成，各组分剪碎按质量比3:2:3:2:5:3比例混合，加8倍量蒸馏水浸泡1h，文火水煎2次，每次30min，合并滤液浓缩至每ml含生药4.8g。选用清洁级SD大鼠10只，雌雄不限(购自河北医科大学实验动物中心，许可证号:1112043)，体重300±20g。按0.4ml/100g灌胃给予大鼠何首乌饮，1次/d，连续7d，末次给药1h后，乙醚麻醉大鼠，颈动脉插管放血，分离血清。

1.3 细胞分组处理 出生10-20d幼年雄性SD大鼠，无菌取双侧睾丸，用胶原酶Ⅰ消化至生精小管分散，1500r/min离心15min，加等量的PBS清洗3次，4℃离心(1100r/min，7min)，弃上清，用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养液稀释细胞至1×106/ml，接种于96孔培养板中，37℃、5% CO2培养箱中培养。培养的Leydig细胞采用3β-HSD特异性染色进行鉴定[3]。正常组:Leydig细胞用DMEM/F12培养基培养128h;Leydig细……