贺晓磊，王丽红，高 宇△，刘晓燕，李桂芳

(1.承德医学院，河北承德 067000;2.承德医学院附属医院)

脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase，FASN)是人体内脂肪酸从头合成途径的关键酶，在人体的能量代谢中具有重要作用。研究发现，在恶性肿瘤中FASN的表达升高，活性增强，并且FASN表达升高严重影响肿瘤患者的预后。乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，国内外学者均发现，伴有2型糖尿病的乳腺癌患者预后不良。2型糖尿病发病机制之一是由于胰岛素抵抗产生的高胰岛素血症，引起体内血糖升高。乳腺癌合并2型糖尿病是乳腺癌复发和转移的独立预后危险因素，但发病机制不明[1-2]。本研究拟观察高糖、高胰岛素环境对乳腺癌细胞MCF-7 FASN表达的影响，探讨FASN在乳腺癌合并糖尿病发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 DMEM低糖培养基，美国Hyclone公司;小鼠抗人FASN单克隆抗体，美国BD公司;小鼠抗人β-actin单克隆抗体，美国Santa Cruz公司;辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG二抗，美国KPL公司;胎牛血清、D-glucose，上海生工;BCA蛋白定量试剂盒、ECL超敏发光液，北京普利莱公司;生物合成人胰岛素，诺和诺德公司;MCF-7细胞，由承德医学院附属医院中心实验室提供。

1.2 细胞培养与分组 低糖DMEM培养基培养MCF-7细胞，含10%胎牛血清，100U/ml青霉素，100U/ml链霉素，D-glucose浓度5mmol/L，37℃、5% CO2培养箱中培养。当细胞长满至80%时，用0.25% Trypsin-EDTA消化传代。实验分为对照组、高胰岛素组、高糖组和高糖高胰岛素组。对照组D-glucose浓度5mmol/L;高糖组D-glucose浓度20mmol/L;高胰岛素组D-glucose浓度5mmol/L，胰岛素浓度125mU/L;高糖高胰岛素组D-glucose浓度20mmol/L,胰岛素浓度125mU/L。每组细胞培养12h，提取总蛋白。

1.3 Western印迹分析 采用Western Blot法检测MCF-7细胞FASN蛋白的表达。……