薛 倩，张志华，赵 蕾，郝长来△

(1.承德医学院，河北承德 067000;2.承德医学院附属医院)

近年来，国内外大量文献证明丙戊酸钠(VPA)具有抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的作用，能调节细胞周期，诱导多种实体瘤和急性白血病细胞分化和凋亡[1-3]。肿瘤的发生被认为是细胞凋亡与细胞增殖平衡失调的结果，目前发现多种肿瘤与细胞凋亡规律异常有关，癌基因和抑癌基因的突变、失活、失调包含于发病机制之中。本研究以t(9;22)携带有特征性融合基因BCR/ABL慢性髓系白血病(CML)细胞株K562细胞为靶细胞，探讨VPA对慢性髓系白血病细胞的增殖抑制作用。

1 材料与方法

1.1 材料 K562细胞株，中国医学科学院血液学研究所王建祥教授惠赠。VPA、RPMI 1640、噻唑蓝(MTT)，美国Sigma公司;胎牛血清，上海生工公司;Bcl-2、Bax、β-actin一抗和二抗，美国Santa公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养:K562细胞置于含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中，加入青霉素(100U/m1)和链霉素(100U/ml)，在37℃、5% CO2饱和湿度培养箱中培养。

1.2.2 细胞增殖的MTT法检测:取对数生长期K562细胞，接种于96孔板内，调整密度为2×105/ml，每孔90μl，实验组细胞分别加入不同浓度的VPA(0.5、1、2、3、4mmol/L)，10μl/孔，对照组细胞不加药物，另设空白组(只加培养基，不加细胞和药物)，每组均设3个复孔。96孔板置于37℃、5% CO2培养箱培养72h后，加入5mg/ml的MTT溶液20μl/孔，继续培养4h，然后加入三联裂解液[10% SDS+5% 异丁醇+1% HCL(10mol/L)，100μl/ 孔]，37℃放置过夜后，用酶标仪于波长570nm处读取吸光度(OD)值，根据OD值计算细胞增殖抑制率:细胞增殖抑制率(%)=[对照孔OD值-实验孔OD值]/[对照孔OD值-空白孔OD值]×100%。并计算细胞增殖抑制率为50%时的药物浓度(IC50)。

1.2.3 Western Blot法检测K562细胞Bax和Bcl-2蛋白的表达:取对数生长期的K562细胞，调整细胞密度为5×105/ml,分为对照组和VPA 3mmol/L处理组。……