吕丽艳 夏美玲 姚淑娟 刘伯阳 温达静

胃癌的发病率和病死率有着明显的地域性，主要分布在亚洲的一些国家，例如日本、中国和其他东亚国家，有较大的危害性[1]。而感染幽门螺杆菌（Hp）是胃溃疡、十二指肠溃疡及原发性胃癌的主要致病因素。根治Hp是预防溃疡和胃癌的主要临床策略。甲硝唑作为以往最有效的治疗药物在临床出现较多耐药病例，这给Hp的防治带来较大麻烦[2]。发现耐药菌株和正常感染菌株的差异，寻找更为有效的治疗策略成为当前研究者普遍研究的热点。蛋白质组学技术已经广泛应用于癌症标记物的筛选中、药物靶标发现及临床疾病的早期诊断中。蛋白质组学技术，如高压液相色谱、二维电泳、表面增强激光电离质谱等，在生物学领域越来越多地发挥着重要作用。本实验应用二维电泳串联MALDI-TOF的方法，分析正常Hp菌与耐甲硝唑Hp菌的蛋白表达差异，从而为发现药物靶点提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验菌株 Hp 26695菌株（上海第二医科大学惠赠）。

1.2 实验仪器与试剂 质谱仪美国AB公司VOYAGER Biospeetromet；双向凝胶电泳仪器：安玛西亚有限公司；十二烷基磺酸钠(SDS)、二硫苏糖醇(DTT)、三轻甲基胺基甲烷(TriS)、甘氨酸、漠酚蓝、乙二胺四乙酸均购自德国Merck公司；碘乙酞胺(IAM)、低熔点琼脂糖凝胶购自美国Sigma公司；甲酸、碳酸氢铵从美国Fisher公司购买；测序级胰酶、牛血清白蛋白(BSA)、蛋白酶抑制剂Roehe公司购买；线性IPG胶条购自GE Healtheare Amersham公司。其他化学试剂主要购于本地化学试剂公司。

1.3 试验方法……