杨晓敏，杨 华

(遵义医学院附属医院1.呼吸一科;2.病理科，贵州 遵义 563099)

原发性肺癌大多为非小细胞肺癌(non－small cell lung cancer，NSCLC)，是严重威胁人类健康和生命的常见恶性肿瘤。侵袭和转移是恶性肿瘤的基本生物学特征，也是临床上绝大多数肿瘤患者的致死因素。近年来研究表明HMGB1在全身多种恶性肿瘤中高表达，与肿瘤侵袭性密切相关。本研究通过检测HMGB1在NSCLC组织中的表达，探讨HMGB1在NSCLC发生、发展及预后中的作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取遵义医学院附属医院胸外科2010年1月至2011年12月外科手术切除的原发性NSCLC组织标本64例。其中男52例，女12例，年龄39～75岁。病理组学分型:鳞癌34例，腺癌30岁。病理分级:Ⅰ级14例，Ⅱ级23例，Ⅲ级27例。TNM分期:Ⅰ期31例，Ⅱ期16例，Ⅲ期17例。有淋巴结转移39例，无淋巴结转移25例。所有患者术前均未接受化疗、放疗及其他抗癌治疗。对照组为20例癌旁正常肺组织。随机选取20例NSCLC组织标本及20例癌旁正常肺组织标本进行RT－PCR检测。

1.2 实验方法

1.2.1 试剂 兔抗人HMGB1单克隆抗体(武汉博士德生物技术有限公司)，二抗即用型快捷免疫组织化学Elivison plus广谱试剂盒(福州迈新生物技术公司)，TRIzol RNA抽提试剂［中国宝生物工程(大连)有限公司］，RNA纯化试剂盒(上海华舜生物技术有限公司)，高容量逆转录酶试剂盒(美国Applied Biosystems公司)，Power SYBR Green PCR预混试剂盒［中国宝生物工程(大连)有限公司］。

1.2.2 免疫组织化学染色检测HMGB1的表达 所有标本取材后用10%甲醛固定，石蜡包埋。采用免疫组织化学Elivison二步法，步骤参考说明书。采用已知阳性NSCLC组织作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。表达……