徐 妍，徐水凌

(1.遵义医学院珠海校区，广东珠海 519041;2.嘉兴学院医学院 医学微生物学与免疫学教研室，浙江 嘉兴314001)

创伤弧菌(Vibrio vulnificus，Vv)为存在于牡蛎、虾、蚌等甲壳类海产品中的嗜盐革兰阴性弧菌，可引起伤口感染、胃肠炎、肌膜炎、原发性败血症等［1－3］，具有繁殖速度快、致病力强、致死率高等特点。我们前期研究发现，创伤弧菌在感染小鼠树突状细胞(dendritic cell，DC)细胞时，可诱导DC发生凋亡，但其特殊的致病机制尚末十分清楚［4］。JAK/STAT通路具有调控细胞增殖、分化和凋亡等多种生理功能，其中的STAT3在细胞信号转导过程中起着重要作用［5－6］。创伤弧菌诱导DC凋亡时，STAT3信号分子的作用值得研究。本研究通过建立创伤弧菌(Vv 1.1758株)侵入小鼠树突状细胞(DC 2.4)的细胞模型，检测不同感染时段DC 2.4细胞的细胞凋亡率和STAT3表达情况，旨在进一步明确创伤弧菌侵入小鼠树突状细胞时STAT3信号分子的作用，为深入研究创伤弧菌的致病机制提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 细菌株和细胞株主要试剂 创伤弧菌(V.vulnificus 1.1758)标准菌株购于中国科学院微生物研究所;小鼠树突状细胞DC2.4细胞株由浙江大学免疫研究所惠赠，以10%胎牛血清(FBS)、100U/mol青霉素和链霉素的RPMI1640培养液在37℃、5%CO2环境中培养。

1.2 主要试剂 RPMI1640细胞培养液购自美国Gibco公司;胎牛血清(Fetal bovine serum，FBS)购自杭州四季青生物制品有限公司;STAT3引物、GAPDH引物(由上海赛百盛基因技术公司合成);dNTP、RNase Inhibitor、DNA－marker(大连宝生物有限公司);TRIzol逆转录酶等购自美国sigma公司;Stat3(124H6)鼠单克隆抗体、p－Stat3(Ser727)单克隆抗体购自美国Cell signaling technology公司，异硫氰酸荧光素(FITC)标记的兔抗鼠IgG购自美国Sigma公司。……