刘园园，何晓然，张艳磊，李小琼，唐彦萍

(遵义医学院生物化学教研室，贵州遵义 563099)

金钗石斛为兰科多年草本植物，具有降血糖、抗氧化、调节免疫等作用。对糖尿病、心血管等疾病具有一定疗效［1］。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是NOS的一个亚型，生理情况下合成NO量很少，而在病理情况时在白介素、肿瘤坏死因子等作用下可诱导其大量而持久地产生NO，从而导致肾脏损伤［2］。并且已有实验表明，DN时iNOS活性及诱导型NOS/结构型NOS(iNOS/cNOS)比值增加，提示影响DN中肾小球NOS mRNA表达主要为iNOS mRNA［3］。因此，本实验通过检测肾脏中 iNOS表达水平来探讨金钗石斛水煎剂防治DN的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 金钗石斛(遵义赤水金钗石斛基地提供)，雄性SD大鼠(第三军医大动物实验中心提供，许可证号:SCXK(渝)2007－0005)，马来酸罗格列酮(天津葛兰素史克公司)，链脲佐菌素STZ(美国sigma公司)，鼠抗大鼠iNOS抗体(ab49999，英国abcam公司)，辣根过氧化物酶标记山羊抗鼠IgG(北京博奥生物技术有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 动物模型的建立及分组给药 健康雄性SD大鼠60只，用链脲佐菌素 (STZ)60mg/kg单次腹腔注射，72 h后测血糖，连续3 d血糖大于16.7 mmol/L确定为糖尿病大鼠［4－5］。将大鼠随机分为:正常组(NC组)、模型组(DN组)、罗格列酮组(RGZ组，给予罗格列酮2 mg/kg)、金钗石斛低(LD组)、中(MD组)、高(HD组)剂量组(分别给予相当于金钗石斛生药的5、10、20 g/kg体重计量)。各组分别给药12周后，摘取肾脏，去肾包膜，取肾皮质分装后－80℃保存。

1.2.2 Real－time PCR 检测大鼠肾皮质中 iNOS mRNA表达 取50 mg肾皮质加1 mL Trizol经过匀浆、萃取、沉淀、洗涤、干燥、溶解提取RNA，测定RNA含量后，逆转录和扩增均按试剂盒说明书操作，所用引物序列(见表1)。……