尚培中，李晓武，蔡大伟，温艳春，谷化平，高占明

胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，起病隐匿，症状和体征缺乏特异性，早期诊断困难，确诊时大多已属中晚期，手术切除率较低，5年生存率不足5%，其高病死率与高侵袭、转移性密切相关［1-3］。研究证实，Midkine在肿瘤侵袭和转移过程中发挥了重要作用［4-6］。本研究应用免疫组化 EliVisionTMplus法对胰腺癌组织进行Midkine检测，旨在探讨其表达与胰腺癌临床病理指标的关系，为指导临床治疗提供理论依据，为判断预后提供客观标志物。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集解放军251医院2000年3月1日—2010年2月28日胰腺癌根治性手术切除标本70例，男44例，女26例;年龄33～79岁，平均62.3岁。均经组织病理学诊断为原发性胰腺导管腺癌，其中高、中、低分化腺癌分别为25例、26例和19例;同时选取距肿瘤至少3 cm以上癌旁非肿瘤胰腺柔软组织标本15例。所有病例均无其他严重内科疾病或其他恶性肿瘤，术前未行化疗、放疗及免疫治疗。依据国际抗癌联盟(International Union for Cancer Control，UICC)第6 版标准［7］进行 TNM 分期。

1.2 方法 手术标本经10%中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规制备4 μm厚切片，65℃烘烤备用。采用微波 －枸橼酸钠缓冲液修复抗原。兔抗人Midkine多克隆抗体、EliVisionTMplus免疫组化染色试剂盒、DAB显色液均购自迈新生物技术有限公司。免疫组化染色采用EliVisionTMplus法，染色步骤严格按照试剂盒说明书进行。用随试剂所附已知阳性对照片做阳性对照，癌旁胰腺组织标本做阴性对照，PBS溶液代替一抗做空白对照。

1.3 结果判断标准 在未知患者临床资料的情况下，由两位有经验的病理医师独立对染色切片进行观察并确认。……