马升俊 肖永君 韦子斌 许成良

南宁市第二人民医院检验科，广西南宁 530031

地中海贫血简称地贫，是一种常染色体显性遗传性疾病，是由于珠蛋白基因缺失或突变导致珠蛋白肽链合成障碍引起的溶血性贫血。本病以地中海沿岸国家和东南亚各国多见，在我国以广东、广西、海南等省区发病率较高，被世界卫生组织列为危害人类健康的6种常见病之一[1]。目前，采用高效液相色谱法（HPLC）的全自动血红蛋白分析仪已越来越多地应用于地贫筛查诊断[2]，为了解该仪器在地中海贫血筛查诊断中的临床应用价值，本研究对5738例受检样本进行检测分析，并对筛查异常者进行地贫基因检测，其分析结果如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月～2012年6月在南宁市第二人民医院生殖医疗中心就诊，并接受地贫筛查诊断的育龄人群5738例，其中，男2498例，女3240例，年龄23～48岁。对筛查异常者进行地贫基因检测。所有受检对象用EDTA-K2真空抗凝管采集静脉血2 mL。

1.2 仪器与试剂

美国BIO-RAD 公司生产的VARIANTⅡ全自动血红蛋白分析仪及配套试剂；美国应用生物系统公司提供的ABI9700 核酸扩增仪；珠海黑马医学仪器公司的GSG-2000 核酸凝胶图像分析系统；广州达安基因公司提供的α、β地中海贫血基因诊断试剂盒；深圳亚能公司提供的α地中海贫血点突变试剂盒。

1.3 方法

样本采集后用VARIANTⅡ全自动血红蛋白分析仪进行地贫筛查；将筛查结果异常的样本，采用多重聚合酶链反应（PCR）和反向斑点杂交法（RDB）进行地贫基因检测，检测 6 种常见的 α 地贫 （--SEA、-α3.7、-α4.2缺失及 CS、QS、WS点突变）和 14种常见 β 地贫（-29M、-28M、17M、βEM、41-42M、43M、71-72M、654M、31M、IVSI-5M、IVSI-1M、27-28M、14-15M、IntM）。

1.4 判断标准

HbA2降低和（或）出现快速区带初诊为α地贫，HbA2和HbF 一项或两项增高初诊为β地贫；HbA2 和HbF 正常参考范围为2.5%～3.5%和＜1.5%；以上任意一项或多项异常则判断为地贫筛查异常。

2 结果

2.1 血红蛋白分析筛查结果

5738例受检者中，共筛查出830例异常，筛查检出率为14.46%（830/5738）。按诊断标准，筛查拟诊α地贫480例，占 57.83%（480/830），筛查检出率为 8.37%（480/5738）。拟诊β 地贫316例，占38.07%（316/830），筛查检出率为5.51%（316/5738）。拟诊 β 复合 α 地贫 11例，占 1.33%（11/830），筛查检出率为0.19%（11/5738）。此外，检出异常区带HbH 13例，HbE 8例，HbQ 2例，分别占1.57%、0.96%和0.24%。830例地中海贫血筛查异常分布特点见表1。

2.2 地贫基因检测结果

830例筛查异常者经地贫基因分析，确诊743例，确诊率为89.52%（743/830）。基因诊断为 α 地贫的有413例，占55.59%（413/743），符合率为 86.04%（413/480）；诊断为 β 地贫313例，占 42.13%（313/743），符合率为 99.05%（313/316），有4例诊断为β复合α地贫；诊断为β复合α地贫17例，占2.29%（17/743），在初诊的11例中有10例相符合，符合率为90.91%（10/11），1例基因诊断为β地贫；在13例出现HbH 区带病例中基因诊断均为中间型α地贫；8例出现HbE 区带经基因诊断5例为βEM/N 地贫，3例为β复合α地贫；2例出现HbQ 区带基因检测均为-α4.2/αα。743例地贫基因型分布特点见表2。

3 讨论

地中海贫血是属于珠蛋白基因缺失或突变所造成的遗传性疾病，按其受累基因分为α地贫和β地贫。地贫的筛查常用血红蛋白电泳、红细胞指数、红细胞脆性试验等方法，虽操作要求低，成本低廉，但又因其敏感性和特异性较低，人为影响因素较大，存在较多的漏诊和误诊现象。临床上对地贫的诊断和鉴别主要依靠血红蛋白分析，但最后的确诊和类型判断常需要采用基因诊断[3]。本次研究用的全自动血红蛋白分析仪应用HPLC 对人血红蛋白HbA2 及HbF 进行自动化定量的测定，可将地贫初步分类为α地贫和 β 地贫，同时还可检测出HbS、HbE、HbQ、HbJ 等异常血红蛋白，是一个介于筛查与确诊的试验；HPLC 法与碱性电泳法相比，具有快速高效、自动化程序高、准确性和重复性良好等优点[4]。

表2 743例地贫基因型分布特点

本次研究，以基因分析作为参考方法，采用HPLC 技术的全自动血红蛋白分析仪对5738例育龄人群进行地贫筛查，共筛查出830例异常，筛查检出率为14.46%，与卢秋维[5]报道的14.27%相近。其中，α地贫筛查检出率为8.37%，经地贫基因诊断符合率为86.04%，以轻型--SEA/αα地贫为主，其次为静止型 -α3.7/αα地贫。对13例筛查出现HbH 区带的样本进行基因检测，结果均为中间型α地贫（-α3.7/--SEA 8例，-α4.2/--SEA2例，αCSα/--SEA2例，αWSα/--SEA1例）。研究结果表明，HPLC 法检测血红蛋白对中间型α地贫有较高的符合率，而对轻型和静止型α地贫有较高漏诊率；由于临床上α地贫常表现为HbA2含量偏低或正常[6]，因此，通过HbA2结果降低对α地贫筛查起一定提示作用[7]。而HPLC法检测血红蛋白对β地贫是介于筛查与诊断之间的一个比较理想的方法，已被国际地贫协会推存为β地贫的常规筛查方法[8]。本次研究，β地贫筛查检出率为5.51%，经地贫基因诊断符合率为99.05%，筛查结果与基因诊断有良好的符合性。由于β地贫复合α地贫时，多表现为β地贫的特征[9]，本次研究，有4例基因诊断为β复合α地贫其筛查初诊为β地贫；在8例筛查出HbE 区带病例中，有3例诊断为 β 复合 α 地贫（βEM/N 复合-α3.7/αα 2例，βEM/N 复合--SEA/αα 1例），因此，对筛查出的β地贫在做基因诊断时应同时进行α地贫基因检测，以避免漏诊。

本次研究结果表明，应用HPLC 法的全自动血红蛋白分析仪对β地贫的诊断有良好的符合性，对α地贫有一定的提示作用，在没有条件进行地贫基因检测的地区，该方法结合临床资料、常规检查，可用于地贫的筛查诊断。

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