隋 淼 王晓波 袭荣刚 孙佳丹

1.解放军第二一〇医院国家药物临床试验机构，辽宁大连 116021；2.大连医科大学，辽宁大连 116015

泮托拉唑钠为胃壁细胞质子泵抑制剂，在中性和弱酸性条件下相对稳定，在强酸性条件下迅速活化，其pH 依赖的活化特性，使其对H+-K+-ATP 酶的作用具有更好的选择性。本品能特异性地抑制壁细胞顶端膜构成的分泌性微管和胞浆内的管状泡上的H+-K+-ATP 酶，引起该酶不可逆性的抑制，从而有效地抑制胃酸的分泌。由于H+-K+-ATP 酶是壁细胞泌酸的最后一个过程，故本品抑酸能力强大。它不仅能非竞争性抑制促胃液素、组胺、胆碱引起的胃酸分泌，而且能抑制不受胆碱或H2受体阻断剂影响的部分基础胃酸分泌。本品与其他药物配伍用时，具有药物间相互作用小的优点。本品通过肝细胞内的细胞色素P450 酶系的第Ⅰ系统进行代谢，同时也可以通过第Ⅱ系统进行代谢。当与其他通过P450 酶系代谢的药物配伍使用时，本品的代谢途径可以通过第Ⅱ酶系统进行，从而不易发生药物代谢酶系的竞争性作用，减少体内药物间的相互作用。无致突变、致癌和致畸作用。本文采用高效液相色谱（HPLC）法测定健康人群血浆中泮托拉唑钠的含量，并进行药动学研究，从而为临床应用提供药动学参考数据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-10ATvp 高效液相色谱仪，SPD-10Avp 紫外检测器，AUW120D分析天平（均为日本岛津公司），N2000 色谱数据工作软件（浙江大学智达信息工程有限公司），FA1004电子天平（上海恒平科学仪器有限公司），JA2003N 电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；TGL-16G 台式高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；XW-80A 微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）；KS 康式振荡器 （江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；MTN-2800W 氮吹浓缩仪（天津奥特塞恩斯仪器有限公司）；pHS-25 数字酸度计（上海伟业仪器厂）。

1.2 试药

泮托拉唑钠肠溶片试验制剂（规格：40 mg/片，按泮托拉唑计算，贵州保和堂制药有限公司），泮托拉唑钠肠溶片（泰美尼克，规格：40 mg/片，沈阳东宇药业，批号：080901）；泮托拉唑钠标准品、非那西丁标准品内标物（均由中国药品生物制品检定所提供）；甲醇、乙腈、甲基叔丁基醚为色谱纯，其余均为分析纯，二次重蒸水；空白人血浆（由解放军第二一〇医院输血科提供）。

2 方法与结果

2.1 受试者选择采用双周期自身随机交叉试验设计

选择健康受试者20例，男、女各10例，平均年龄（26.7±1.5）岁，平均体重（57.7±4.8）kg，平均身高（155.7±3.7）cm。体格检查示肝、肾功能无异常，不吸烟、嗜酒。女性健康受试者受试期间避开月经、妊娠及哺乳期。试药前2周内未服用任何其他药物。临床试验方案经解放军第二一〇医院医学伦理委员会批准，受试者均签署知情同意书。

2.2 试验方案

20 名试验者随机等分为两组，每组试验者每次试验时分别服用泮托拉唑钠肠溶片试验制剂或参比制剂。试验者于试验前一日晚餐后，禁食不禁水12 h，次日清晨空腹分别单次口服泮托拉唑钠肠溶片试验制剂和参比制剂40 mg，以200 mL 温开水送服，并作记录。服药2 h 后可自由饮水，服药4 h 后进统一清淡低脂饮食。试验期间由医护人员进行监护。间隔7 d 后交叉给药，重复上述试验。服药期间禁烟、酒和含咖啡因类饮料，避免剧烈运动和长时间卧床。

2.3 血样采集

受试者于服药前（0 h）和服药后 0.75、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 h，取肘静脉血 5 mL，置肝素化试管中 （采血过程避光），4.0×103r/min 离心5 min，分离血浆，置-70℃冰箱保存待测。

2.4 血药浓度测定

2.4.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18 柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；预柱：琛航 C18保护柱；流动相：磷酸盐缓冲液[磷酸调 pH 为（3.60±0.02）]-乙腈（65∶35）；检测波长：288 nm；柱温：30℃；流速：1.2 mL/min；进样量：20 μL。

2.4.2 标准溶液的配制 精密称取泮托拉唑钠对照品27.69 mg（相当于泮托拉唑24.77 mg），置50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为495.4 μg/mL 的泮托拉唑储备液。用甲醇-水（1∶1）稀释储备液配制泮托拉唑系列标准溶液和质控标准溶液。过程见表3 所示（以上过程均严格避光操作）。精密称取非那西丁对照品10.12 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为101.2 μg/mL的内标储备液；精密量取5.0 mL 内标储备液，置50 mL 量瓶中，用甲醇-水（1∶1）稀释至刻度，制成浓度为 10.1200 μg/mL的内标溶液（以上过程均严格避光操作）。

2.4.3 样品预处理 精密量取血浆样品500 μL，依次加入甲醇-水（1∶1）50 μL，内标溶液（10.1200 μg/mL 非那西丁溶液）50 μL，2%氨水 200 μL，甲基叔丁基醚 3 mL，涡旋混合30 s，振荡 10 min，离心 6 min（15 000 r/min），移取上层有机层置另一试管中，在40℃水浴，空气流下吹干，残留物以35%乙腈100 μL 复溶，涡旋混合60 s，移置 1.5 mL 离心管中，离心 3 min（15 000 r/min），取上清液 20 μL 进样分析（以上过程均严格避光操作）。

2.5 方法专属性

色谱条件下，药物、血浆中的内源性杂质和内标物分离完全，峰形良好，色谱见图1。非那西丁保留时间为6.0 min，泮托拉唑保留时间为7.2 min，分离度大于1.5，血浆中内源性物质不干扰泮托拉唑和内标物非那西丁的测定。

图1 血浆中泮托拉唑高效液相色谱图

2.6 标准曲线的制备与定量下限

精密量取空白血浆500 μL，分别加入泮托拉唑系列标准溶液50 μL，配制成血浆中泮托拉唑浓度为19.8，49.5，99.1，198.2，495.4，990.8，2972.4，5944.8 ng/mL 的 血 浆 样 品 ，按“2.4.3”项下同法试验，每一浓度进行双样本分析，制备泮托拉唑的标准曲线。以待测物浓度（ng/mL）为横坐标X，待测物与内标物的峰面积比值（AS/Ai）为纵坐标Y，用加权最小二乘法[3]进行线性回归，求得血浆标准曲线方程：Y=0.003 11X-0.002 69，r=0.9999 线性范围为 19.8～5944.8 ng/mL。血浆中泮托拉唑定量下限为19.8 ng/mL。

2.7 回收率与精密度试验

取空白离心管分别加入不同浓度的泮托拉唑质控标准溶液 50 μL，再加入空白血浆 500 μL，配制成低、中、高（39.6，396.3 和 4954.0 ng/mL）3个 浓 度 的 血 浆 样 品 ，按“2.4.3”项下同法试验，在不同天的时间内连续制备并测定3个分析批，每批样品分为低、中、高3个浓度水平，每个浓度进行6 样本分析。计算日内和日间精密度。见表1。

另取对应浓度的泮托拉唑质控标准溶液各50 μL，分别加入非那西丁内标溶液 （10.1200 ng/mL 非那西丁溶液）50 μL（每浓度 6 样本分析），涡旋混合 30 s，取 20 μL 上清液进样分析，获得相应色谱峰面积（6次测定的平均值）。以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。结果表明，泮托拉唑血浆样品的提取回收率符合有关规定[1]，内标提取回收率稳定。提取回收率为69.0%～73.7%。

2.8 稳定性

取空白血浆500 μL分别加入不同浓度泮托拉唑质控标准溶液50 μL，配制成血浆中泮托拉唑浓度为39.6 和4954.0 ng/mL 的血浆样品（每浓度3 样本分析）的血浆样品若干份，一份按“血浆样品处理方法”项下同法试验，在室温放置24 h 后进样分析，考察预处理后血浆样品在室温条件下的稳定性；一份加入标准溶液在室温放置24 h 后，按“血浆样品处理方法”项下操作，进样分析，考察血浆样品在室温条件下的稳定性；一份加入标准溶液在室温放置6 h 后，按“2.4.3”项下同法试验，进样分析，考察血浆样品在室温条件下的稳定性；另一份于-20℃冰箱冷冻，反复冻融3次后，按“2.4.3”项下同法试验，进样分析，考察血浆样品经3次反复冻融稳定性；一份于-20℃冷冻保存80 d 后，按“2.4.3”项下同法试验，进样分析，考察血浆样品在长期冷冻条件下的稳定性。结果表明，质控样品测定结果均符合有关规定[1]。见表2。

表1 泮托拉唑精密度与回收率试验结果

表2 泮托拉唑稳定性试验结果（±s，n=3）

表2 泮托拉唑稳定性试验结果（±s，n=3）

稳定性检测血浆样品浓度39.6 ng/mL测得量（ng/mL） RSD（%）4954.0 ng/mL测得量（ng/mL） RSD（%）新鲜配制室温6 h室温24 h冷冻48 h反复冻融3次80 d 39.2±1.3 35.3±0.6 39.4±1.3 40.8±2.5 41.9±1.1 43.0±0.9 3.4 1.8 3.4 6.0 2.7 2.0 5170.6±136.7 4978.0±31.7 5156.0±194.9 5318.1±103.3 4830.6±176.0 5178.1±96.0 2.6 0.6 3.8 1.9 3.6 1.9

2.9 结果

2.9.1 血药浓度-时间曲线20名健康受试者口服泮托拉唑钠肠溶片受试制剂和泮托拉唑钠肠溶片参比制剂后的血药浓度-时间曲线均数对比图，见图2。

图2 20例受试者口服受试制剂和参比制剂后泮托拉唑的平均血药浓度-时间曲线均数对比图

2.9.2 药代动力学参数 采用WinNonlin 5.2.1 数据统计软件，计算20例受试者口服受试制剂或参比制剂后泮托拉唑的药代动力学参数。见表3。

表3 两制剂动力学参数（±s，n=20）

表3 两制剂动力学参数（±s，n=20）

参数 试验制剂参比制剂tmax（h）Cmax（ng/mL）AUC0-t（ng/mL·h）AUC0-∞（ng/mL·h）t1/2（h）2.8±0.6 2985.6±641.2 9682±4478 10019±4876 1.83±0.56 2.9±0.8 3231.4±923.5 9388±4125 9627±4156 1.96±0.52

2.9.3 生物等效性检验 对主要药代动力学参数对数转换后进行方差分析，并进一步采用双单侧t检验和[1-2α]置信区间法进行生物等效性评价，其中tmax采用非参数检验法。结果表明，泮托拉唑钠肠溶片受试制剂的AUC0-t、AUC0-∞和Cmax均拒绝生物不等效假设。受试制剂中，泮托拉唑AUC0-t的90%置信区间为参比制剂的92.7%～112.2%，AUC0-∞的90%置信区间为参比制剂的92.2%～112.6%，Cmax的90%置信区间为参比制剂的85.6%～104.3%，tmax在受试制剂与参比制剂间的差异无统计学意义。

根据以上结果判定，贵州保和堂制药有限公司提供的泮托拉唑钠肠溶片（受试制剂，规格：40 mg/片，按泮托拉唑计算）与沈阳东宇药业有限公司生产的泮托拉唑钠肠溶片（参比制剂，商品名：泰美尼克，规格：40 mg/片，按泮托拉唑计算）具有生物等效性。

3 讨论

本试验所建立的高效液相色谱法测定人体血浆中泮托拉唑的浓度[1-6]，具有分析时间短、操作简便、灵敏度高等特点，适用于泮托拉唑钠肠溶片人体生物等效性研究。

受试制剂和参比制剂均为肠溶片，检测结果显示受试制剂及参比制剂的tmax均在2.8 h 左右，前两个取血点大部分未检测出泮托拉唑的血药浓度，完全符合肠溶片的特点。通过本实验检测结果统计的Cmax及t1/2 值可知，采样持续时间满足3～5个半衰期及所检测到的末点血药浓度满足Cmax的1/20 的要求。

采用WinNonlin 5.2.1 数据统计软件，对药代动力学参数进行计算，受试制剂与参比制剂的药代动力学参数与文献[7-15]报道基本一致。以贵州保和堂制药有限公司提供的泮托拉唑钠肠溶片为受试制剂，以AUC0-t计算，与参比制剂相比泮托拉唑的相对生物利用度为 （104.9±26.1）%。对泮托拉唑的主要药代动力学参数进行方差分析表明，两制剂的Cmax、AUC 经对数转换后，在制剂间、周期间均无显著性差异，两制剂具有生物等效性。

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