关统伟，赵辉平，车振明

(西华大学生物工程学院，四川成都 610039)

大英盐湖位于四川省中部地区的遂宁市大英县境内，1.5亿年前地球的两次造山运动在四川大英县形成了地下古盐湖盆地，含盐量超过22%，其盐卤储量达42亿 t［1］。2011年自大英盐湖中分离获得1株极端嗜盐产孢放线菌，菌株编号为TRM4064，经16S rRNA系统发育分析初步确定为1株潜在的新种，经形态学观察、生理生化检验、细胞化学和分子遗传学等多相分类手段的测定，确认菌株TRM4064为多孢放线菌属(Actinopolyspora)的一个新种。研究目的是通过多相分类技术确定该菌种的系统分类地位。多相分类是采用现代分类的多种方法，综合表现型和遗传型信息进行分类鉴定和系统发育研究的过程，它是当前研究微生物各级分类单位最有效的方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 2011年12月自大英盐湖样品中分离获得的1株极端嗜盐放线菌，菌株编号为TRM4064。

1.1.2 主要试剂及仪器 QIAquik PCR纯化试剂盒(QIAGEN)、蛋白酶 K(Merck)、Taq酶(TaKa-Ra)、dNTPs(TaKaRa)、DNA Marker(Sangon)，其他生化试剂均为国产分析纯。凝胶成像仪(Biorad)、电泳仪(Bio-rad)、PCR 扩增仪(Bio-rad)。

1.2 方法

1.2.1 菌种形态特征观察和生理生化实验 用光学显微镜和扫描电子显微镜观察菌株的形态和细胞的运动性。碳、氮源生长实验采用Mata等［2］建议的培养基(NaCl 100 g，KCl 2 g，MgSO4.7H2O 0.2 g，KNO31 g，(NH4)2HPO41 g，KH2PO40.5 g);抗生素敏感性实验和其他生理生化实验参照文献［2-3］描述的方法进行。

1.2.2 菌种醌、脂肪酸及细胞全水解糖组分分析微生物细胞醌组分的提取和纯化参照Collins［4］的方法，然后根据Groth［5］的方法，利用高压液相色谱(HPLC)测定醌组分。细胞脂肪酸采用Sasser［6］的方法测定。……