王迎进，闫军，周俊丽，孔丽霞，张海容

（忻州师范学院生化分析技术研究所，山西忻州 034000）

酸枣叶系鼠李科（Rhamnaceae）枣属（Ziziphus）植物酸枣（Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa（Bunge）Hu ex H.F.Chou）的叶，主要分布于我国北部太行山区一带。酸枣叶中含有丰富的钙、磷、铁等矿物质，以及维生素，三萜烯酸、氯原酸、黄酮、碳水化合物等药用成分，在宁心安神，提高睡眠质量，增强心脑血管收缩性，降低血压，降低血液中的脂肪密度及提高免疫力等领域具有其独到功效，是一种极具价值的天然保健饮品和药用资源[1]。研究证实，植物多糖在提高机体免疫力、抗肿瘤、抗应激、降血脂等方面具有多种生物活性，引起了科研工作者广泛关注。目前有关酸枣肉和酸枣仁多糖研究报道较多[2-3]，而对酸枣叶多糖的研究却鲜见报道。本文采用超声强化方法对酸枣叶多糖进行了提取测定，并对其在清除·OH、O2-·、DPPH·和 ABTS·及还原能力做了一个较为全面、系统的研究，旨在为酸枣叶多糖在的药物和功能性食品开发方面提供参考。

1 材料

1.1 试剂

酸枣叶：2011年5月采摘于山西代县；葡萄糖、抗坏血酸、BHT、邻二氮菲、DPPH和ABTS：均为美国Sinma公司生产；实验用水为二次蒸馏水；其他试剂均分析纯。

1.2 仪器

752型紫外光栅分光光度计：上海精密科学仪器有限公司；RE-52AA旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂；JYD-650L超声细胞粉碎机：上海之信仪器有限公司；SHZ-D（III）型循环水式真空泵：河南豫华仪器有限公司；HH-S型恒温水浴锅：陕西太康生物科技有限公司。

2 方法

2.1 标准曲线的绘制

精密称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品10mg，加水溶解，定容至100mL容量瓶中，得0.1mg/mL葡萄糖标准溶液。分别移取葡萄糖液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90 mL 于 10 mL 比 色 管中，加水至2 mL，再加5%的苯酚溶液1 mL和浓硫酸5 mL，沸水浴15 min。冷却后在490 nm下，以试剂空白为参比，测定吸光度A。以样品浓度c对吸光度A作图，得回归方程：Y=58.571x－0.028 4，R2=0.999 6。

2.2 酸枣叶多糖的提取及含量测定

将酸枣叶洗净、烘干、粉碎、过筛（60目）后得酸枣叶粉。称取酸枣叶粉50 g于圆底烧瓶中，用石油醚（沸程60℃～90℃）回流脱脂2 h，抽滤，挥干。用95%乙醇回流2 h（以除去酸枣叶中的小分子），干燥得酸枣叶药渣。准确称取脱脂后酸枣叶粉20 g于烧杯中，加蒸馏水250 mL，在超声功率为50%，提取温度为80℃下，超声提取30 min，过滤。滤渣重提两次，合并滤液，浓缩至约100 mL，加入4倍体积的无水乙醇，4℃静置24 h，离心，洗涤，蒸馏水复溶得酸枣叶粗多糖（CP）试液。

按上述方法重新制备粗多糖试液，用Sevag法[4]除蛋白7次，收集上清液，醇沉，离心，洗涤，蒸馏水溶解，得酸枣叶脱蛋白多糖（DP）试液。

按标准曲线实验方法测得酸枣叶中CP和DP含量分别为1.05%和0.84%。

2.3 酸枣叶多糖对自由基清除作用的测定2.3.1 羟自由基清除作

用按文献[5]方法测定。

2.3.2 超氧阴离子自由基清除作用

按文献[5]方法测定。

2.3.3 DPPH·自由基清除作用

按文献[7]方法测定。

2.3.4 ABTS总抗氧化能力

按文献[8]方法测定。

2.3.5 还原能力

按文献[8]方法测定。

3 结果与分析

3.1 酸枣叶多糖对羟自由基的清除作用

羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标。酸枣叶CP、DP和VC对·OH的清除效果见图1。

由图1可知，随着CP和DP浓度的增加，对·OH的清除作用逐渐增强。当浓度为0.4 mg/mL时，CP和DP对·OH的清除率分别为84.75%和41.47%，两者对Fenton反应产生的·OH均具有良好的清除作用。CP的清除能力高于DP，说明在酸枣叶粗多糖中蛋白成分发挥了一定的清除·OH作用[9]。

图1 酸枣叶多糖对·OH的清除作用Fig.1 The·OH scavenging capacity of polysaccharide from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

3.2 酸枣叶多糖对超氧阴离子自由基的清除作用

酸枣叶CP、DP和BHT对O2－·清除效果见图2。

图2 酸枣叶多糖对O2-·的清除作用Fig.2 The O2-·scavenging capacity of polysaccharides from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

由图2可知，随着多糖浓度不断增加，CP和DP对O2－·清除率逐步上升，呈明显的量效关系。在反应开始4 min，浓度为0.5 mg/mL时，CP和DP对O2－·的清除率分别为37.44%和23.81%，说明两者具有一定的清除O2－·能力，但均低于同浓度的BHT。

3.3 酸枣叶多糖对DPPH·自由基的清除作用

酸枣叶多糖对DPPH·的清除作用如图3。

由图3可知，CP具有较强的DPPH·清除能力，当CP浓度低于0.2 mg/mL时，其清除能力与BHT相当。当浓度高于0.2 mg/mL时，CP和DP的清除能力均小于阳性对照物BHT。当浓度为0.4 mg/mL时，CP和DP对DPPH·自由基的清除率分别为61.64%和23.50%，同浓度下，CP对DPPH·的清除能力高于DP。

3.4 酸枣叶多糖对ABTS·总抗氧化能力

酸枣叶多糖对ABTS·的清除能力如图4所示。

图3 酸枣叶多糖对DPPH·自由基的清除作用Fig.3 DPPH·scavenging capacity of polysaccharides from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

图4 酸枣叶多糖对ABTS·的清除作用Fig.4 ABTS·scavenging capacity of polysaccharides from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

由图4可知，CP和DP对ABTS·均具有很强的清除作用，且随着多糖浓度的增加，清除率逐渐增大。当多糖浓度为0.02 mg/mL时，CP的清除率达80.3%，DP的清除率达44.5%，同条件下酸枣叶多糖CP的清除能力远高于DP。

3.5 酸枣叶多糖还原能力的测定

酸枣叶多糖的还原能力如图5所示。

由图5可知，CP和DP均具有一定的还原能力，可作为电子供应者，与自由基反应，使之转化为较稳定的物质，中断自由基链式反应。随着浓度的增加，CP和DP的还原能力均在不断的增强，且CP高于DP。

4 结论

图5 酸枣叶多糖的还原能力Fig.5 Reducing capacity of polysaccharides from the leaves of Ziziphus jujuba var.spinosa

本文采用·OH、O2-·、DPPH·、ABTS·和还原能力 5种方法研究了酸枣叶多糖的体外抗氧化性，结果表明：CP 和 DP 均具有明显清除·OH、O2-·、DPPH·和ABTS·作用及还原能力，且量效关系明显。因而，酸枣叶多糖是一种非常有效的天然抗氧化剂，具有广泛的开发前景。

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[3]黄小娟,姜建国,林福兰,等.酸枣仁多糖的提取及其镇静催眠作用的研究[J].现代食品科技,2006,22(2):37-39

[4]齐慧玲,魏绍云,王继伦,等.Sevag法去除白及多糖中蛋白的研究[J].天津化工,2000(3):20-21

[5]蔡仲军,陈仕江,伊定华,等.不同产地冬虫夏草清除羟基自由基作用的研究[J].中草药,2004,35(1):57-59

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