杜利君，蒋兴亮

(1.南充市中心医院，川北医学院第二临床医学院;2.川北医学院附属医院，四川南充 637000)

体外建立人血管内皮细胞模型是研究人体大血管内皮功能的主要手段之一。由于内皮细胞株ECV304在形态学、基因学等生物特性上与内皮细胞比较存在明显差异［1］，因此，体外分离和原代培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)已成为国内外学者获取内皮细胞的重要途径。本实验在借鉴其他学者体外分离、培养HUVECs技术的基础上，通过大量的实验并对此加以改良，旨在建立一种操作简便、且能够获得数量较多及活力良好的HUVECs的分离、培养方法，为进一步研究血管内皮细胞的功能及阐明相关疾病的生理和病理机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

M199培养液和胎牛血清分别为Invitrogen公司和Hyclone公司产品，IV型胶原酶、内皮细胞生长因子(ECGS)、肝素钠均为Sigma公司产品，胰蛋白酶为Amresco公司产品，PBS、兔抗人Ⅷ因子抗体及FITC标记的羊抗兔IgG抗体为北京中杉金桥公司产品，青霉素和链霉素为华北制药股份有限公司产品。25 cm2培养瓶和15 mL无菌离心管为Corning公司产品，0.22 μm一次性过滤器为Millipore产品。二氧化碳细胞培养箱、超净工作台为Heal Force公司生产，倒置荧光显微镜为Olympus公司生产。

1.2 脐带来源

收集川北医学院附属医院剖腹产新生儿脐带。选择无HBV和HIV感染、无妊娠期高血压的健康孕妇，剖腹产手术后无菌获取15～20 cm新生儿脐带，保存于4℃ PBS液中，2 h内分离HUVECs。

1.3 方法

1.3.1 人脐静脉内皮细胞的分离 无菌条件下取长度为15～20 cm的新生儿脐带，立即于超净工作台内剪去脐带两端的钳痕、血肿并修齐断面，找到管壁较薄、管腔略大的脐静脉。……