周慧英，程 艺，孙磊磊，王 雨，吉艺宽，任 涛，琚春梅

（华南农业大学兽医学院，广东广州510642）

伪狂犬病病毒（Pseudorabies viurs，PRV）属疱疹病毒科（Herpesviridae），α-疱疹病毒亚科（Alpha-herpesvirinae）。该病毒可感染多种动物，猪为其贮存宿主，且可引起潜伏感染［1］。早期蛋白0（early protein 0，EP0）是目前已知的3个PRV早期蛋白之一。研究表明，EP0可以促进PRV立即早期蛋白（immediate-early protein）基因IE180、糖蛋白G （glycoprotein G，gG）（gX）、胸苷激酶（thymidine kinase，TK）启动子的转录，在与IE180蛋白共同作用下，EP0蛋白激活TK和gG（gX）启动子转录的效率更高［2-3］。Ono等［2］研究表明EP0蛋白可提高病毒基因组DNA的感染性，有利于病毒粒子的复制。

对EP0蛋白结构域的研究表明，该蛋白中存在与锌指结构类似的环指结构域，是结合DNA、RNA及蛋白质-蛋白质相互作用的区域，但与EP0蛋白同源性很高的单纯疱疹病毒1型（Herpes simplex virus type 1，HSV-1）的ICP0、水痘-带状疱疹病毒（Varicella-zoster virus，VZV）的 ORF61和马疱疹病毒1型（Equine herpes virus 1，EHV-1）的基因63的产物已被证明并不结合DNA、RNA［4］，因此EP0蛋白可能在蛋白质-蛋白质相互作用方面具有重要作用。对与PRV同属α-疱疹病毒的HSV-1ICP0的研究证实了该蛋白与病毒粒子中的ICP4、VP22等均存在相互作用［5］。Guo H 等［6］对EP0蛋白的研究发现它能够与至少6种核蛋白存在相互作用，推测EP0蛋白可能是通过与细胞的转录因子相互作用来发挥转录调控功能［7］。本研究拟在大肠埃希菌中对含有GST标签的伪狂犬病病毒EP0基因进行表达，为深入研究EP0蛋白与宿主细胞及PRV病毒粒子中其他蛋白的相互作用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 病毒及菌株 伪狂犬病病毒强毒株分离株，大肠埃希菌 TOP10及BL21（DE3），表达载体pGEX-4T-1，均由华南农业大学兽医微生物学与免疫学教研室保存。

1.1.2 试剂 LA Taq酶、限制性内切酶EcoRⅠ及NotⅠ、T4DNA连接酶，DNA Marker，IPTG、琼脂糖均购自宝生物工程（大连）有限公司；……