徐 超，李苗云，冯松凯

（1.河南出入境检验检疫局，河南郑州450003；2.河南农业大学食品科学技术学院，河南郑州450002）

在牛、羊等动物皮毛中可以携带蓝舌病病毒（Bluetongue virus，BTV）、口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，FMDV）、山羊痘病毒（Goatpox virus，GPV）、绵羊痘病毒（Sheeppox virus，SPPV）、牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV）等5种病毒。这几种病毒通过皮毛传播的风险较高，动物感染后，病死率高，并将迅速形成暴发和流行趋势，对家畜和皮毛相关从业人员健康造成重大危害。目前，我国已经成为世界上最大的皮毛进口国，进口皮张来源广泛，进出口批次量大频繁，急需一种能对皮毛携带病毒高通量、快速筛查的方法。但迄今为止，国内外只有少量对皮毛携带一种或两种病毒检测方法的研究，检测方法主要依靠经典的血清学方法和PCR技术［1-4］，已经无法适应对进口皮毛进行快速、大批量筛查检测的要求。为此，本研究采用基因芯片技术，根据BTV、FMDV、GPV、SPPV和BVDV等5种病毒的特异性序列设计多条引物和探针，研究同时检测5种病毒的基因芯片检测方法。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 毒株 牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus，BVDV），绵羊痘病毒（Sheeppox virus，SPPV），山羊痘病毒（Goatpox virus，GPV）HN-1株，伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）HN-3株，猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）HN-2株，禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）HN-1株，新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）HN-5，蓝舌病病毒（Bluetongue virus，BTV）和O型口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus serotype O，FMDV／O），均由河南出入境检验检疫局技术中心微生物实验室保存。

1.1.2 主要试剂 MasterMix Taq酶、TIANscript M-MLV逆转录酶，100bp DNA Marker，TIANprep Mini普通质粒小提试剂盒，TIANgel Midi普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒，购自天根生化科技（北京）有限公司；DNA Maker DL 1 500和DL 600，购自北京索莱宝科技有限公司；MiniBEST病毒核酸提取试剂盒，pMDTM18-T Vector试剂盒，X-Gal，IPTG，EcoRⅠ酶和HindⅢ酶，购自宝生物工程（大连）有限公司；……