鸡干扰素调节因子7的原核表达及多克隆抗体的制备
2013-08-14崔鹏飞邓国华韦良孟焦培荣
崔鹏飞,邓国华,韦良孟,焦培荣*,廖 明*
(1.华南农业大学兽医学院,广东广州510642;2.人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室
农业部兽用疫苗创制重点实验室 广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室,广东广州510642;3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江哈尔滨150001)
干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)是干扰素调节因子家族的成员之一,在Ⅰ型干扰素的诱导表达过程中发挥着重要作用。最初IRF7因结合EB病毒编码基因EBNA-1的Qq启动子区域而被发现[1]。IRF7在大多数细胞中呈低水平表达,但当细胞受到病毒感染、脂多糖、干扰素、某些化学物质如丁酸钠刺激后,细胞内的IRF7表达水平会迅速升高,进而诱导Ⅰ型干扰素的表达[2]。IRF7除了参与调节干扰素介导的先天性免疫反应外,还参与调节细胞生长和凋亡、调节免疫细胞的分化和激活等过程[3-5]。目前,有关IRF7的研究主要集中在哺乳动物,而对于禽类IRF7的研究相对较少,本研究旨在通过原核表达系统表达鸡干扰素调节因子7(chIRF7)蛋白,并以其为免疫原制备鼠抗鸡干扰素调节因子7(chIRF7)蛋白多克隆抗体,为进一步研究家禽免疫调节过程中chIRF7的生物学功能奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 质粒、菌株及实验动物 原核表达载体pET30a,感受态细胞JM109、BL21(DE3)均由本实验室保存,9日龄~11日龄SPF鸡胚与6周龄~8周龄Balb/c雌性小鼠购自广东省实验动物中心。
1.1.2 主要试剂 Phusion高保真DNA聚合酶,限制性内切酶EcoRⅠ、NotⅠ均购自NEB公司;Ligation High高效连接试剂盒购自Toyobo公司;RNA提取试剂盒购自Qiagen公司;质粒小提和胶回收试剂盒购自OMEGA公司;……
