殷 帅* 林 海蒋秋桃孟庆玉雷玉萍吴公平

（1 湖南省食品药品检验研究院，湖南 长沙 410001；2 湖南省食品药品监督管理局，湖南 长沙 410001）

气相色谱质谱联用法测定干制鱼中敌百虫残留

殷 帅1* 林 海1蒋秋桃1孟庆玉1雷玉萍1吴公平2

（1 湖南省食品药品检验研究院，湖南 长沙 410001；2 湖南省食品药品监督管理局，湖南 长沙 410001）

目的建立干制鱼中敌百虫残留的气相色谱质谱联用检测方法。方法采用Agilent 7890A/5975C 气相色谱/质谱联用仪，HP-5MS毛细管柱(i.d. 30m×0.32mm×0.25μm)，样品中敌百虫经三氯甲烷提取，提取液浓缩、脱脂、净化后，用气相色谱法-质谱联用仪测定，外标峰面积法定量，子离子丰度比定性。结果敌百虫线性范围为0.1～5.0μg/mL，r=0.9998，检测限为0.02mg/kg，在0.1～2.0mg/kg的3个添加水平的平均回收率为84.8%～107.7%。结论本方法可以准确、快速的检测出干鱼中敌百虫的含量。

敌百虫；气相色谱质谱联用法

敌百虫是高效、低毒及低残留的杀虫剂。对鱼体内外寄生的吸虫、线虫、棘头虫及危害鱼苗、鱼卵的枝角类、桡角类、蚌钩介幼虫和水蜈蚣等均有良好的杀灭作用。但由于敌百虫在弱碱性条件下，可形成残毒性更大的敌敌畏[1]，当pH值为8～10时，敌百虫转变成敌敌畏仅需半小时。因此，不但要顾及鱼虾的毒性效应，而且对人、畜的安全也不可忽视。

近年来，我国曾多次发现有不法商贩使用敌百虫加工咸鱼，给人们的身体健康和生命安全带来了极大的安全隐患。针对这一现象，我们建立了干制鱼中敌百虫的测定方法。该方法可准确检测干制鱼中的敌百虫，能够为餐饮食品安全风险监测提供技术支撑。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

GC-7890A气相色谱仪，带5975C质谱仪；syncoreanalyst多样品蒸发系统；pt3100d型数显程控式均质机；Thermo Heraeus 高速冷冻离心机；HMS-350涡旋混合器；XS205型电子分析天平。

1.2 试剂与试药

敌百虫标准品（Trichlorphon，纯度：98.2%，由Sigma公司提供）；乙腈、三氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷均为色谱纯，无水硫酸钠、乙酸锌均为分析纯，水为去离子纯化水；高纯氦气。

2 方法与结果

2.1 GC-MS条件

色谱条件：色谱柱为HP-5MS毛细管柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm）；载气:高纯氦气，恒流，流速为1.0mL/min；脉冲不分流进样，进样量1μL。进样口温度200℃，柱温升温程序：从50℃起，保留2min，以10℃/min升至170℃，保留1min，再以20℃/min升至200℃，保留3min。

质谱条件：EI源，轰击电压70eV；离子源温度230℃，四极杆温度150℃，辅助接口温度260℃；采集模式：全扫描与选择离子监测（SIM）同时进行，扫描范围：50～550amu；特征选择离子见表1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准溶液的制备

取敌百虫标准品约10mg，精密称重，置20mL容量瓶中，用乙酸乙酯配制成浓度为500μg/mL的标准储备液。精密吸取敌百虫标准储备液适量，用乙酸乙酯逐级稀释成浓度分别约为0.1、0.5、1、2、5µg/mL的标准系列。

表1 选择特征离子与定量离子

2.2.2 供试品溶液的制备

取干鱼绞碎混匀，取约5g（精确至0.01g），置50mL离心管中，加入乙酸锌0.5g，再加入2+9乙腈溶液20mL，均质仪均质2min，4000r/min离心3min，上清液转移至250mL分液漏斗中，离心管中残渣再加入乙腈20mL，均质2min，4000r/min离心3min，合并提取液于同一250mL分液漏斗中，加20g/L硫酸钠水溶液100mL，震荡混匀，加入30mL二氯甲烷，剧烈振摇3min，静置分层，将下层二氯甲烷液通过无水硫酸钠柱，用250mL浓缩瓶收集，上层再加入30mL二氯甲烷，重复提取，提取液合并至250mL浓缩瓶中，用旋转蒸发器浓缩至干，定量加入1mL乙腈溶解残留物，加入乙腈饱和的正己烷1mL，涡旋振荡2min，置冰箱中冷冻保存2～3h，高速离心2min，取上清液，即得。

2.2.3 空白对照溶液的制备

作总试剂表的空白实验，按上述供试品溶液制备的方法，从“加入0.5g乙酸锌”开始，制成空白对照溶液。空白对照应无干扰。

2.3 测定法

精密吸取标准溶液、供试品溶液及空白对照溶剂各1μL，注入气相色谱仪，测定，色谱图及质谱图见图1～5。

2.4 线性关系考察

以5个浓度水平的敌百虫标准溶液，按上述测定条件，分别注入气相色谱质谱联用仪，以亚磷酸二甲酯的定量离子的峰面积对浓度绘制标准曲线。在0.1～5.0μg/mL浓度范围内峰面积（Y）与浓度（X）的线性回归方程为Y=140616X+18596，线性相关系数达到0.9998，线性关系良好。

2.5 回收率与精密度试验

称取5.0g干制鱼空白样品，分别加入约0.5μg（平行处理3份）、5μg（平行处理6份）、10μg（平行处理3份）敌百虫标准溶液，按照2.2.2操作方法制备供试品溶液，回收率及精密度实验结果见表2。

2.6 方法检测限

图1 空白对照溶液

图2 标准溶液(1 亚磷酸二甲酯;2 敌敌畏)

图3 供试品溶液

图4 亚磷酸二甲酯质谱全扫描图

图5 敌敌畏质谱全扫描图

表2 回收率及精密度试验结果（n=12）

以干制鱼空白样品进行加样回收测定，在0.02mg/kg添加水平时，亚磷酸二甲酯定性离子的S/N为3，因此本方法的检测限为0.02mg/kg。

3 讨 论

3.1 敌百虫的测定方法一般有化学显色法[2]、气相色谱法[3]、液相色谱-串联质谱法等[4]。因本实验检测的样品基质是干制鱼，干扰因素很多，采用化学显色法和气相色谱法检测易产生假阳性结果，专属性不强。液相色谱-串联质谱法检测灵敏度高，专属性强，但仪器配备的难度大，费用高。故本实验采用气相色谱质谱联用法检测干制鱼中敌百虫含量，测定结果可靠，专属性强，检测灵敏度高。

3.2 敌百虫易分解成亚磷酸二甲酯和三氯乙醛[5]，经质谱检测，标准品除出现亚磷酸二甲酯的峰外，还出现一个明显的色谱峰，经查看质谱扫描图，该物质与敌敌畏的质谱图基本一致，可能是敌百虫在气相色谱仪的高温条件下转化形成了敌敌畏。故参考“农业部783号公告-3-2006水产品中敌百虫残留量的测定”，敌百虫以亚磷酸二甲酯含量计，进行定量。

3.3 干制鱼中油脂类成分含量很高，按照“农业部783号公告-3-2006水产品中敌百虫残留量的测定”的前处理方法处理样品后，供试品溶液的颜色较深，放置一段时间后还可能析出白色固体物质。这样的含有大量杂质的供试品溶液非常容易污染气相色谱仪的衬管和色谱柱，并且质谱图中会出现很多杂峰，给分析带来很大的麻烦。本实验在前处理步骤中加入已经饱和的正己烷萃取杂质及冷冻高速离心，能大量去除供试品溶液中的脂类杂质，减少了仪器的污染，也使质谱图干净了很多，在不影响检测结果准确性的条件下方便了结果分析。

[1] 詹玉莲.有机磷农药中毒的急救及注意事项[J].中国社区医师, 2007,3(9):53.

[2] 方波,钟良康.食品中敌敌畏与敌百虫快速测定方法的探讨[J].现代预防医学,2006,33(4):580.

[3] 张晶,任一平.火腿、鳗鲞中敌百虫和敌敌畏的气相色谱快速检测[J].中国卫生检验杂志,2006,16(12):1475-1477.

[4] 黄捷,白桂昌,吕轶峰,等.快速高分离液相色谱-串联质谱法测定水产品中敌百虫残留[J].中国卫生检验杂志,2010,20(7):1666-1667.

[5] 农业部783号公告-3-2006水产品中敌百虫残留量的测定[S]. 2006-12-161.

R155.5+1

B

1671-8194（2013）12-0075-02

湖南省科技重大专项课题湖南省食品安全监控技术体系研究与示范

*通讯作者：E-mail：ys2275836@163．com