林存智，孙 勇，王 军，蒋捍东

新甲型H1N1流感轻症患者血清免疫学特征分析及临床意义研究

林存智，孙 勇，王 军，蒋捍东

目的 探讨新甲型H1N1流感轻症患者血清免疫学特征，指导临床治疗。方法 选择新甲型H1N1流感轻症患者26例，取外周血清2 ml，采用ELISA方法进行单核细胞趋化蛋白－1(MCP－1)、白介素6(IL－6)、白介素8(IL－8)、白介素10(IL－10)的检测。同时选取普通感冒患者32例，取外周血清2 ml，做对照研究。结果两组患者外周血清中IL－8水平差异有统计学意义 (t=6.12，P＜0.05)，而MCP－1、IL－6和IL－10水平差异无统计学意义 (t=0.56～1.52，P＞0.05)。结论 新甲型H1N1流感轻症患者和普通感冒患者外周血清免疫学特征基本相似，临床治疗方案也基本一致。

流行性感冒，人;流感病毒A型，H1N1亚型;细胞因子;免疫学特征

2009年4月北美地区出现新甲型H1N1流感患者，短短几个月播及全球200多个国家和地区，造成全球大流行。我国疫情形势由初期的输入性为主逐渐变为境内感染为主，由散发患者向聚集性疫情发展，由城市逐渐向农村蔓延，流行后期重症患者急剧增加。我国采取了防、控、治并举的措施，有效遏制了疫情的进一步蔓延。2010—2011年冬春季不断出现散发患者，2012年春季同样存在散发的新甲型H1N1患者，中华人民共和国卫生部官方网站公布传染病消息显示2012年4月份国内确诊新甲型H1N1流感患者111例，无死亡患者。因此，为正确理解和治疗新甲型H1N1流感轻症患者，现将新甲型H1N1流感轻症患者的免疫学特征报道如下，并与普通感冒患者进行对照研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 患者选择 选取新甲型H1N1流感轻症患者26例，男19例，女7例;年龄19～22岁，平均年龄为 (20.6±1.5)岁。选取普通感冒患者32例，男23例，女9例;年龄为17～25岁，平均年龄为 (22.5±2.2)岁。两组患者年龄、性别间具有均衡性，且均无其他基础疾病。

1.1.2 诊断标准 新甲型H1N1流感诊断标准为中华人民共和国卫生部2009年颁布的第三版诊疗方案［1］;普通感冒诊断根据蔡柏蔷等［2］主编的《协和呼吸病学》诊断标准进行诊断。

1.2 研究方法

1.2.1 血清细胞因子检测方法 取确诊的新甲型H1N1流感轻症患者外周血2 ml，2 000 r/min离心，离心半径14 cm，10 min，留取血清，冷存－20℃冰箱备用;用同样的方法留取32例普通感冒患者血清2 ml，离心，冷藏备用。

1.2.2 实验试剂 单核细胞趋化蛋白－1(MCP－1)试剂盒由欣博盛生物科技有限公司提供，白介素6(IL－6)，白介素8(IL－8)，白介素10(IL－10)试剂盒由上海西唐生物科技有限公司提供。实验操作均按照试剂盒提供的实验操作说明进行。

1.3 统计学方法 采用SPSS 15.0统计软件进行数据处理，计量资料以 (±s)表示，两组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两组患者外周血清免疫学特征比较，IL－8水平两组间差异有统计学意义 (P＜0.05)，其余细胞因子表达差异均无统计学意义 (P＞0.05，见表1)。

表1 新甲型H1N1流感轻症和普通流感患者外周血细胞因子表达±s，pg/L)Table 1 The expression of cytokines in the two groups

表1 新甲型H1N1流感轻症和普通流感患者外周血细胞因子表达±s，pg/L)Table 1 The expression of cytokines in the two groups

注:MCP－1=单核细胞趋化蛋白－1，IL－6=白介素6，IL－8=白介素8，IL－10=白介素10

组别 例数MCP－1 IL－8 IL－6 IL－10 H1N1流感 26 147.0±50.3 743.5±68.3 8.5±0.9 197.9±160.1普通感冒 32 132.0±45.7 641.0±59.5 8.8±0.6 175.0±150.3 t＞0.05 ＜0.05 ＞0.05 ＞0.05 1.19 6.12 1.52 0.56 P值值

3 讨论

新甲型H1N1流感是由变异后的甲型H1N1流感病毒株所引起的急性呼吸道传染病，有以下流行病学特点及临床特征:(1)通过飞沫、气溶胶、直接接触或间接接触传播，患者在发病前一天就具有传染性［3］;(2)人群普遍易感;(3)隐性感染:无症状感染者，也具有传染性［1］;(4)临床表现与普通流感相似［4］。普通感冒是一种轻度、能自限的上呼吸道感染。常见病原菌有鼻病毒、冠状病毒、流感病毒和副流感病毒，其中以鼻病毒和冠状病毒最常见。在寒冷季节多发，发病机制为:病毒进入鼻孔，随后感染上呼吸道的上皮细胞，48 h内病毒复制高峰，持续3周。但这两种由不同病毒引起的疾病却存在一定程度的免疫机制相似性。

流感病毒侵入机体后，刺激机体产生一定的免疫反应，从而对机体的细胞因子分泌产生一定影响。IL－6由淋巴样和某些非淋巴样细胞产生，其生物学活性刺激细胞生长和促进多种细胞的增殖，促进细胞分化，如B细胞分化和Ig的分泌、细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)分化，协同白介素2(IL－2)增强CTL中穿孔素基因的表达，并增加T细胞IL－2的产生和IL－2受体的表达，诱导巨噬细胞、神经细胞和NK细胞分化。IL－8是由单核细胞或巨噬细胞产生，是一种具有趋化活性的细胞因子，能够诱导中性粒细胞定向迁移，增加炎性反应。

单核细胞趋化蛋白属趋化因子CC亚家族，分子量多为8～10 kD的蛋白组成。包括MCP－1～3，可由炎性递质刺激的单核/巨噬细胞、成纤维细胞、B细胞、内皮细胞和平滑肌细胞等分泌，对单核/巨噬细胞有趋化和激活作用。MCP－1也可介导嗜碱性粒细胞趋化和激活。MCP－1是β亚家族的代表，可趋化单核细胞。主要功能是招募血液中的单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等进入感染发生的部位。

IL－10由活化胸腺细胞、巨噬细胞、角朊细胞和正常B细胞、活化单核细胞、外周血T细胞产生。IL－10是一种重要的抗炎细胞因子。病毒感染早期，IL－10的产生是机体控制和限制病毒感染所致炎性反应的重要机制之一［5］。IL－10主要抑制白介素12(IL－12)和干扰素－γ(IFN－γ)分泌，从而促进Th2型细胞分化，而且它是B细胞终分化因子。在B细胞对抗流感病毒抗原时，IL－10起关键作用，有助于在感染中和感染后产生保护性抗体。本研究结果与某些国外研究报道相似，如Nakajima等［6］对2009甲型H1N1流感死亡患者尸检发现，与正常人比较其血清肺组织中 IL－10、IL－6、MCP－1水平均升高。

新甲型H1N1流感与普通感冒虽然由不同的病原体感染所致，但临床症状具有一定的相似性。本研究表明机体对病毒的免疫反应同样存在一定的相似，外周血清中IL－10、IL－6和MCP－1表达水平无差异性，而IL－8表达具有一定的差异性，临床治疗的方案基本一致。普通感冒一般应用抗病毒的中成药和对症治疗即可康复，而新甲型H1N1流感轻症患者，同样也可以对症治疗，应用中成药或中成药汤剂治疗，与抗病毒治疗的疗效相似［7］。

毛会军等［8］研究报道，感染新甲型HINl病毒后，外周血清中IL－10、IL－8与正常人比较均升高，而单核/巨噬细胞产生的IL－8却显著升高，与本研究的结果相似。但是否与单核/巨噬细胞吞噬病毒有关，值得以后进一步研究。

志谢:感谢青岛市疾病预防控制中心实验室汪照国主任提供新甲型H1N1流感患者血清标本，感谢青岛市胸科医院检验科江国峰主任协助进行实验标本检测。

1 中华人民共和国卫生部.甲型H1N1流感诊疗方案 (2009年试行版第三版)［J］.中华临床感染病杂志，2009，3(2):257－259.

2 蔡柏蔷，李龙芸.协和呼吸病学［M］.北京:中国协和医科大学出版社，2011:815－816.

3 王星，杜钟珍，李莉，等.甲型H1N1流感的临床特点研究［J］.实用心脑肺血管病杂志，2012，20(4):603.

4 程文，章隆辉，汪克文.新型甲型H1N1流感危重症临床分析［J］.实用心脑肺血管病杂志，2012，20(11):1792.

5 Graham MB，Dalton DK，Oiitinan D，et al.Response to influenza infection in mice with a targeted disruption of the interferon－γ gene［J］.J Exp Med，1993，178(5):1725 －1732.

6 Nakajima N，Ham S，Sato Y，et al.The first autopsy case of pandemic influenza(A/H1N1 rxlm)virus infection in Japan:Detection of a high copy number of the virus in typeⅡalveolar epithelia cells by pathological and virological examination［J］.Jim J Infect Dis，2010，63(1):67－71.

7 林存智，王军，邹少木，等.甲型H1N1流感病例临床特征分析［J］.中华传染病杂志，2010，28(2):117－118.

8 毛会军，陈良，沈芳.2009流行性感冒患者血清细胞因子的变化特点［J］.感染与微生物，2011，6(1):18－22.

Sero－immunity Characteristics of Mild Cases Infected with Influenza A H1N1 Virus

LIN Cun－zhi，SUN Yong，WANG Jun，et al.Department of Respiratory Medicine，Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College，Qingdao 266003，China

ObjectiveTo explore the sero－immunity characteristics of mild cases infected with influenza A H1N1 virus.MethodsA total of 26 mild cases with the new influenza A H1N1 and 32 cases with common cold were selected.2 ml peripheral blood was drawn from each subject and was tested by ELISA for monocyte chemo－attractant protein－1，interleukin－6，interleukin－8，and interleukin－10.Test results of the two groups were compared.ResultsThe expression of interleukin－8 was significantly different between the two groups(t=6.12，P＜0.05)，while the expression of monocyte chemo－attractant protein－1，interleukin－6 and interleukin－10 was not significantly different(t=0.56－1.52，P＞0.05).ConclusionThe sero－immunology characteristics of the mild cases with the new influenza A H1N1 virus and common cold cases are basically similar，so the therapeutic regimen can also be similar.

Influenza，human;Influenza A virus，H1N1 subtype;Cytokines;Immunology characteristic

R 373.13

A

10.3969/j.issn.1007－9572.2013.03.019

青岛市自然科学基金资助项目 (09－1－1－51－nsh)

266003山东省青岛市，青岛大学医学院附属医院呼吸科 (林存智，孙勇);青岛市胸科医院呼吸科 (王军);上海仁济医院呼吸科 (蒋捍东)

蒋捍东，200127上海市，上海仁济医院呼吸科;

E－mail:jianghd@163.com

2012－11－07;

2012－12－29)

(本文编辑:邢煜)