黄芩的抑菌作用及有效化学成分探讨
2013-06-12宋冬冬
宋冬冬
(河南省济源市人民医院中药房,河南 济源 459000)
黄芩的抑菌作用及有效化学成分探讨
宋冬冬
(河南省济源市人民医院中药房,河南 济源 459000)
目的 探讨黄芩的抑菌作用及有效化学成分。方法 采用超声法以及水煮法对黄芩的有效成分进行提取,并比较两种提取方法所提取的黄芩提取液和黄芩结晶物的体外抑菌效果。结果 超声法提取黄芩的抑菌效果明显优于水煮法提取的黄芩(P< 0.05);超声法提取黄芩结晶物的抑菌效果明显优于水煮法提取的黄芩(P< 0.05)。结论 黄芩具有良好的抑菌作用,并且使用超声法进行有效成分的提取,可以有效的分离黄芩的有效成分,值得临床应用。
肠球菌属细菌;耐药性;药敏试验
黄芩是临床上的常用中药,又被称为黄金茶、山茶根或者烂心草,具有良好的泻火解毒、止血凉血、安胎除热的作用。目前临床上研究表明,黄芩的主要有效成分包括黄芩苷、黄芩苷元、汉黄芩苷以及汉黄芩素等[1]。笔者分别采用两种不同的方法提取黄芩中的有效成分,并探讨黄芩对金黄色葡萄球菌的抑菌作用,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 检测仪器
黄芩成分的提取使用的主要仪器包括:上海亚荣生化仪器厂生产的RE-52AA旋转蒸发器;上海齐欣科学仪器有限公司生产的SW-CJ-2F超净工作台和DHP9162电热恒温培养箱;苏州安泰空气技术有取公司生产的超声波发生器,发生频率为20、800以及1100kHz。
1.2 药品和试剂
黄芩采购于辽宁省药材公司;MH肉汤和琼脂采购于上海微生物试剂有限公司;分析过程中使用的其他试剂浓度均为分析纯。
1.3 菌种
实验用的肠炎沙门氏菌ATCC13076采购于中国食品药品检验所。
1.4 提取方法
1.4.1 水煮法
首先制备水煎提取液:使用天平精确称取50g黄芩饮片,他别加入500g以及400g水煎煮2次,每次煮1h,然后进行过滤,将两次滤液合并,然后浓缩滤液至50mL,此时的黄芩水煎液浓度为1000mg/ mL,经过无菌处理后备用。然后制备结晶物:使用天平精确称取50g黄芩饮片,他别加入500g以及400g水煎煮2次,每次煮1h,然后进行过滤,将两次滤液合并,然后在滤液中加入浓盐酸并将滤液的pH值调节至1~2,并于80℃环境放置30min,静置12h后将上清液弃除,然后加适量水将沉淀物溶解,搅匀后向溶液内加入40%的NaOH溶液,将黄芩素溶解,并将溶液的值调节至6~7,之后加入等量的95%浓度的乙醇,加热至50℃后过滤,使用10%盐酸调节滤液的pH值至2~3,并静置于50℃水浴中30min,使黄芩结晶物能够完全析出,过滤得到结晶物,并用清水将结晶物冲洗至中性,60℃干燥至恒重,得到实验用的黄芩结晶物,最后配制为10mg/mL的溶液,经过无菌处理后备用。
1.4.2 超声提取法
首先取适量(>50g)的黄芩饮片,于60℃进行烘干,然后进行粉碎并使用10目筛进行过滤,使用天平精确称取50g黄芩粗粉,向粗粉中加入10倍量的水,并使用超声进行处理,频率选择20kHz,并注意随时补充水,让溶液的液面保持同一高度,超声处理1h后进行过滤,使用盐酸将滤液的pH值调节至1~2,80℃水浴静置30min,将黄色的结晶物充分析出后进行过滤。向沉淀物中加入蒸馏水并搅匀,然后向溶液中加入40%的NaOH溶液,将黄芩素溶解,并将溶液的值调节至6~7,之后加入等量的95%浓度的乙醇,加热至50℃后过滤,使用10%盐酸调节滤液的pH值至2~3,并静置于50℃水浴中30min,使黄芩结晶物能够完全析出,过滤得到结晶物,并用清水将结晶物冲洗至中性,60℃干燥至恒重,得到实验用的黄芩结晶物,最后配制为10mg/ mL的溶液,经过无菌处理后备用。
1.5 抑菌作用比较方法
将实验用肠炎沙门氏菌接种于MH肉汤中,体积约为3mL,在37℃环境下培养18h,并将菌液稀释到浊度105CFU/mL,然后使用二倍稀释法进行提取物的体外抑菌实验,每个浓度的实验均重复3次。
1.6 统计学方法
采用SPSS17.0软件进行数据的统计与分析,全部数据资料用采用t检验,χ2检验,P<0.05为差异有显著性,具有统计学意义。
2 结 果
2.1 提取液的抑菌浓度
超声法提取黄芩的抑菌效果明显优于水煮法提取的黄芩(P<0.05,表1)。
表1 两种提取方法黄芩提取液的最低抑菌浓度MIC比较
2.2 结晶物的抑菌浓度
超声法提取黄芩结晶物的抑菌效果明显优于水煮法提取的黄芩(P<0.05,表2)。
3 讨 论
黄芩是临床上常用的中药,其中最为主要的有效成分为黄芩苷,具有良好的清热解毒,消炎利胆,保肝抗变态反应的作用,并且具有非常广泛的抗菌谱,对金葡菌、绿脓杆菌以及沙门氏菌均具有十分良好的抑制作用。在临床上,黄芩主要是用于治疗热病烦燥、肺热咳嗽、湿热泻痢以及烦渴等疾病。近年来,有研究发现,黄芩还具有良好的抗病毒作用[2]。
表2 两种提取方法黄芩提取结晶物的最低抑菌浓度MIC比较
传统的黄芩苷提取方法为水煮法,但水煮法的提取时间比较长,而且提取率比较低。因此,为了提高黄芩苷的提取率,笔者采用最新的超声提取法和传统的水煮法进行对比分析[3]。研究结果显示,超声法提取黄芩的抑菌效果明显优于水煮法提取的黄芩,超声法提取黄芩结晶物的抑菌效果明显优于水煮法提取的黄芩。
综上所述,黄芩具有良好的抑菌作用,并且使用超声法进行有效成分的提取,可以有效的分离黄芩的有效成分,值得临床应用。
[1]魏 述 永.黄芩 有 效 成 分 提取物对 沙门氏菌的 抑 菌 活 性比较 研 究[J].中国医药杂志,2008,6(5):40-41.
[2]黎丹戎.汉黄芩素对人卵巢癌细胞株SKOV3裸鼠移植瘤生长及端粒酶活性的抑制作用[J]. 中国药理学通报,2007,23(4):534-538.
[3]郭 京 华 .浅 析 黄 芩 有 效 化 学 成 分及 抑 菌 作 用 [J].中 国 实 用 医药,2012,7(16):195-196.
R22.710.3
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:1671-8194(2013)05-0077-02