陈锋菊张晓羲 宁丽红



有机溶剂沉淀法去除子宫内膜癌血清高丰度蛋白的比较研究

陈锋菊1,2, 张晓羲2, 宁丽红2

(1. 湖南第一师范学院 教育科学系,湖南 长沙, 410205; 2. 湖南科技大学 生命科学学院, 湖南 湘潭, 411201)

建立了一种简便有效、成本低廉的去除子宫内膜癌血清高丰度蛋白的方法. 运用3种不同的有机溶剂(不同体积倍数)处理子宫内膜癌血清样品, SDS-PAGE电泳检测去除高丰度蛋白. 结果表明: 不同的有机溶剂沉淀法都能去除血清样品中绝大部分的高、中丰度蛋白, 但低丰度蛋白质保留、减弱及丢失的现象不一.用1倍体积乙腈可有效去除子宫内膜癌血清样品中的绝大部分高丰度蛋白, 同时保留较多的小分子量蛋白.

有机溶剂; 子宫内膜癌; 高丰度蛋白

人体血清中含有种类多达上千种的蛋白质, 各种蛋白质的含量差异巨大. 而在某些疾病的病理过程中分泌入血的一些低分子量蛋白(<10 kD), 被称为生物标志物[1], 通常认为是一些激素、细胞因子、生长因子等[2—3]. 这些低分子量蛋白的含量相当少, 极易被高丰度蛋白所干扰, 不易显现出来. 因此在对血清蛋白进行研究时, 必须先设法去除血清中的高、中丰度蛋白, 即对低分子量蛋白进行分离提纯. 目前常用的方法主要有免疫亲和层析法、蛋白质沉淀法等. 本研究主要对几种不同的有机溶剂沉淀法去除血清中高丰度蛋白的效果进行比较研究.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1血清样品

2011年10月, 在湖南省肿瘤医院住院的子宫内膜癌患者6例(平均年龄56岁)、同时期的女性体检健康者6例(平均年龄53岁)中, 分别取清晨空腹静脉血3 mL, 迅速于4 ℃静置3 h, 3 000 r/min离心5 min, 提取上清液, 再将上清液静置5 min, 15 000 r/min离心30 min, 去掉白色絮状沉淀, 留上层血清. 分正常组和患者组, 将获得的血清分别混合, 以便消除个体差异. 冰上分装, 每EP管100 μL, 并于-80 ℃冻存备用, 避免反复冻融.

1.1.2 主要试剂和仪器

丙烯酰胺(Acr)、N, N′甲叉双丙烯酰胺(Bis)、十二烷基磺酸钠(SDS)、过硫酸铵(AP)、四甲基乙二胺(TEMED)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、甘氨……