郑琳琳，王佳，贺龙梅，王学峰，王迎春＊

（1.内蒙古大学生命科学学院 内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室，内蒙古 呼和浩特010021；2.内蒙古和信园蒙草抗旱绿化股份有限公司，内蒙古 呼和浩特010021）

“牧草之王”紫花苜蓿（Medicagosativa）是全世界栽培历史最悠久、种植面积最广、利用价值最高的一种豆科多年生优质牧草，广泛种植于以畜牧业为支柱产业的中国西北地区［1－2］。然而这些地区多具有干旱、高盐、低温等生境特点，严重制约着苜蓿生长发育和产量。因此，通过转基因手段培育具有多重抗逆能力的优良品种，对于苜蓿产业的可持续发展具有举足轻重的作用。

在植物应对非生物胁迫的防御机制中，Ca2＋作为第二信使发挥着重要的作用［3］。CIPK（CBL－interacting protein kinase）是近年来鉴定的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可与上游植物特有的Ca2＋传感器钙调磷酸酶B类似蛋白（calcineurin B－like proteins，CBLs）结合，识别并传递胞质钙信号，引发细胞内一系列应激反应［4－5］。通过生物信息学分析，在模式植物拟南芥（Arabidopsisthaliana）和水稻（Oryzasativa）基因组中分别发现26和30个CIPK基因［6］，后在银杨（Populustrichocarpa）［7］、葡萄（Vitisvinifera）［8］、高粱（Sorghumbiocolor）［9］和玉米（Zeamays）［10－11］中相继获得多个CIPK家族成员。多项研究表明，CIPK广泛参与植物对高盐、低钾和干旱等外界刺激的应答反应［12－14］，在拟南芥、水稻、烟草（Nicotianatabacum）等植物中过量表达不同CIPK基因均可提高转基因植株的抗逆能力［15－18］。

本实验以唐古特白刺（Nitrariatangutorum）cDNA为模板，利用PCR技术克隆获得NtCIPK2完整编码序列（complete coding sequence，CDS），在此基础上构建含有该序列的植物表达载体pPZP221－NtCIPK2，采用农杆菌介导法对紫花苜蓿进行遗传转化，经PCR及RT－PCR验证，获得了超表达NtCIPK2基因的转化植株，为利用转基因手段选育抗逆苜蓿新品种奠定基础。……