李玉山

（陕西惠丰制药有限公司，陕西西安 710075）

迷迭香的综合提取工艺研究

李玉山

（陕西惠丰制药有限公司，陕西西安 710075）

介绍了一种新的溶剂提取迷迭香的工艺和方法，通过乙醇直接提取迷迭香，采用逐级溶剂分离的方法对迷迭香油、水溶性成分、脂溶性成分进行综合提取。该方法工艺简单，成本低，并已实现工业化。

迷迭香；迷迭香酸；鼠尾草酸；鼠尾草酚

前言

迷迭香（Rosemary）属唇形科植物，原产于地中海沿岸，盛产于西欧国家（近几年在我国云南、广西、贵州、海南等地进行了栽培）。战国时期，我国曾从西域引种种植，1981年中科院北京植物研究所引入并种植成功[1]。迷迭香具有抗肿瘤，抗艾滋、抗炎、抗氧化，抗血栓，调节免疫保肝降酶等药理作用[2]。迷迭香油可用于治疗肝炎，防止心脑血管疾病，具有提神醒脑、活化脑细胞、增强记忆力的功效[3]。迷迭香酸具有抗血栓和抗血小板聚集的作用，它能抑制静脉血栓形成，阻抑胶原诱导的血小板聚集，促进纤维蛋白溶解活性[4]，还具有较强抗氧化活性，强于咖啡酸，绿原酸，叶酸，还具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤活性[5-6]。鼠尾草酚能有效提高大鼠肝中的谷光甘肽转移酶和醌还原酶的活力，有效抑制DMBA-DNA加成物的生成，并抑制DMBA引起的大鼠肿瘤，是一个选择性很高的乳腺癌细胞增殖抑制剂[7]。溶剂法提取迷迭香是一种最经典、常用的提取方法，一般先通水蒸汽蒸馏去掉迷迭香植物中的精油，再进行提取，工艺复杂、成本高。本研究采用溶剂一次提取、逐级分离的方法，具有工艺简单、成本低等优点。该方法已经工业化，并取得了良好的效果。

1 仪器与试剂

迷迭香采自广西百色地区，迷迭香酸，鼠尾草酸，鼠尾草酚对照品购自sigma公司；石油醚（60～90℃），乙醇、乙酸乙酯均为分析纯。R-201旋转蒸发器，上海申科机械研究所；BS1101型电子分析天平，北京赛多利斯仪器有限公司；101-2-BS电热真空烘箱，上海跃进医疗；美国Waters高效液相色谱仪，日本岛津LC-10AVP高效液相色谱仪。

2 方法与结果

2.1 检测方法

2.1.1 鼠尾草酸和鼠尾酚检测方法

色谱条件：以C18为固定相，乙腈-水为流动相，在285nm下检测。流动相：52%乙腈-10mmol/L冰乙酸，流速0.8mL/min，柱温：室温。

2.1.2 供试品配制：精密称取0.5g样品，加入甲醇25mL，超声提取30min，用甲醇定容于50mL容量瓶中，根据含量高低稀释成上机液，过0.45μm微孔滤膜，按上述色谱条件分析。

2.1.3 迷迭香酸的检测方法

色谱条件：色谱柱，Shim-packVP-ODS（4.6mm×150mm,4.6μm），流动相甲醇-0.1%甲酸液（45∶55v/v），柱温30℃，流速0.8mL/min，检测波长330mm。2.1.4 对照品液配制

精密称取迷迭香酸对照品适量，置于100mL容量瓶中，用稀乙醇溶解，定容，制成浓度为0.244mg/mL的溶液即可。

2.1.5 供试品溶液配制

取迷迭香酸提取物适量，以50%稀乙醇溶解，过滤，滤液作为样品

2.2 提取工艺流程

图1 提取工艺流程图Fig.1 The flow chart of extraction technology

2.3 工艺过程

2.3.1 提取

采用正交设计优选提取工艺，迷迭香粗粉以乙醇回流提取，提取物得率的计算提取物的质量（g）除以所用原料质量（g），得到迷迭香提取物的得率（%）。单因素实验方法对影响提取物得率的几个因素-甲醇浓度，料液比，提取时间，提取温度，提取次数，分别进行了实验。提取条件优化在单因素实验的基础上，确定了甲醇浓度，料液比，提取时间，提取温度4个因素的3水平正交试验，筛选了一个最佳组合，每个处理进行了3个重复，取其平均值进行分析。

选取乙醇浓度，料液比，提取时间，提取温度4个因素进行L9（34）正交试验，优化提取方案，结果见表1，表2。

表1 试验因素水平Table 1 The level of factor of experiment

2.3.2 浓缩

合并提取液，过滤，减压下浓缩，分别浓缩至比重=1.0，1.05，1.08，1.10测乙醇醇度。

2.3.3 萃取

浓缩液以60～90℃石油醚等体积萃取3次，分出石油醚液和醇水液。

2.3.4 精油的制取

将石油醚液浓缩至一半体积后以等量水洗涤3次，水液下一步备用，石油醚液浓缩，脱色后制得产品a。

2.3.5 水溶性抗氧化成分制备

将2.3.3中的水液浓缩至呈浸膏状，以2.3.4中的水液溶解，分出不溶物，水液加入饱和NaCl液，以等体积乙酸乙酯萃取4次，乙酸乙酯液合并浓缩，真空干燥，得产品b。

2.3.6 脂溶性抗氧化成分制备

将2.3.5中的水不溶物直接减压干燥，得产品c。

3 结果分析

3.1 提取工艺优化

表2 正交试验方案Table 2 The orthogonal experiment design

由表2可知影响因素的主次分别为：A→B→D→C，最佳工艺组成A3B3C2D1，即：80%乙醇20倍量，在70℃下提取1.0 h。

3.2 浓缩结果分析

表3 浓缩液比重与醇度的关系Table 3 The relation between the SG of concentrated solution and alcohol degree

由上表可见浓缩至密度1.08g·cm-3比较好，醇度较低，且浓缩也不黏稠。

3.3 产品a的分析

产品a为迷迭香油ρ（20℃）：0.892～0.920，折光系数（20℃）：1.464～1.4720，精油中主含龙脑，乙酸龙脑酯，樟脑，1，8-桉叶油素，菠烯，马鞭草烯酮，月桂烯，对聚伞素。本工艺以高醇度的乙醇将所有成分全部提出，然后再逐个分离，提取液浓缩后为乙醇-水液，此时以石油醚萃取迷迭香油，而石油醚在低醇度乙醇中与其不互溶，因此分层现象明显，可有效地将油类成分萃取出，这是本工艺区别于其他所有工艺的最大不同。

3.4 产品b的分析

产品b为迷迭香酸的水溶性抗氧化成分，经检测其含量高达82.5%，迷迭香酸耐100℃以上高温，浅黄粉末，萃取迷迭香油后的成分，浓缩后以水溶解，而此处的水液来自纯化产品Ⅰ的水液，因此充分节省物耗，同时在提高精油的品质时又不使其他有效成分流失。水溶物过滤，得到水液，为迷迭香酸水溶液，此时加入NaCl减少其溶解度后以乙酸乙酯萃取出，可有效地将迷迭香酸与其他水溶性成分分开，达到纯化之目的。

3.5 产品c的分析

产品c主要含鼠尾草酸和鼠尾草酚，含量分别为22.3%和13.6%，为黄绿色粉末，脂溶性抗氧化成分耐高温，利用水中溶解度不同，将水溶性成分与脂溶性成分分离，工艺既简单又方便，而且在水溶解时生成的沉淀很容易过滤。

4 结论

采用溶剂（乙醇）直接提取迷迭香，然后逐级溶剂分离的方法可行。该方法工艺简单，成本低，易于工业化。该迷迭香的提取方法国内未见报道。

［1］廖霞利,凌敏,赵金和,等．溶剂法提取迷迭香天然抗氧化剂工艺研究［J］．广西工学院学报,2006,17（2）:87～88．

［2］田亚雄,迷迭香的药物应用［J］．医学信息,2002,15（9）：4～5．

［3］廖俊杰,杨伟柱,廖鹏程,等．粤产迷迭香的精油提取及其主要成分分析［J］．中成药,2007,29（7）:1035～1038．

［4］邹延午,徐理纳,田金英．迷迭香酸抗血栓和抗血小板聚集的作用［J］．药物学报,1993,28（4）:241～245．

［5］李荣贵,滕大为,杜桂彩,等．此苏紫愈伤迷迭香酸的纯化及抗菌活性研究［J］．微生物学通报,2000,27:324～327．

［6］MAZUMDERA,NEAMATIN,SUNDER S,et al．Curcunin analogs with altered potencies against HIV-1 integrase as probes for biochemical mechanisms of drug action［J］．J Med chem．,1997,40（19）: 3057～3063．

［7］SINGLETARY K W,MACDENALD C,WALLIG M．Inhibition by rosemary and carnosol of 7,12-dimethylbenz［a］anthracene（DMBA）induced rat mammary tum origenesis and in vivo DMBADNA adduct formation［J］．Cancer lett,1996,104:43～48．

［8］吕岱竹,王明月,袁宏球,等．高效液相色谱法测定迷迭香超临界提取物中的鼠尾草酸和鼠尾酚［J］．分析测试学报,2006,25（3）:109～111．

［9］吴良,袁干军,苏秋玲．高效液相色谱法测定迷迭香中为迭香酸的含量［J］．湖南医学院学报,2006,12（2）:112～114．

Study on the Comprehensive Extraction of Rosemary

LI Yu-shan
（Shaanxi Huifeng Pharmacy Limited Company,Xi’An 710075,China）

A novel technology and method for extracting rosemary by solvent is introduced．The rosemary is extracted by ethanol directly,and the rosemary oil,water-soluble components and fat-soluble components are comprehensively extracted by step-by-step solvent separation．This method has simple process,low cost,and it has been applied in industrial production．

Rosemary;rosmarinic acid;carnosic;carnosol

TQ028.32

B

1001-0017（2013）02-0076-03

2012-10-29

李玉山（1974-）,男，陕西西乡人，硕士，从事天然产物化学研究。E-mail:liyushan0508@sina.com