赵长祺，尹长江

(承德医学院，河北承德 067000)

甲状腺癌是头颈部比较常见的恶性肿瘤之一，其中，约半数以上患者为甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)[1]。国内外研究显示，甲状腺癌是多种因素共同作用的结果，其发生的具体机制较为复杂，目前还尚未完全揭示。CD31，即血小板内皮细胞粘附分子(plateletendothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1),是内皮细胞的标志物，在淋巴管和血管内皮细胞中均有表达。现有研究表明，CD31与甲状腺癌组织的转移有着密切的关系[2]。本试验采用免疫组化和Western-Blot法检测CD31在甲状腺乳头状癌组织和正常组织中的表达，探讨CD31在甲状腺乳头状癌临床治疗上的意义。

1 材料与方法

1.1 临床标本 分别收集承德医学院附属医院2009年9月至2010年8月的甲状腺乳头状癌临床标本60例，癌周组织20例，年龄45-65岁，其中男性患者21例，女性患者39例，经病理检查证实均为原发性甲状腺乳头状癌。取临床病理标本经10%中性甲醛固定，常规脱水透明、浸蜡、包埋，连续切片，切片厚5μm，用于CD31免疫组织化学染色。取临床病理标本新鲜组织冻存于液氮中，用于蛋白免疫印迹检测。

1.2 主要试剂 兔抗CD31多克隆抗体(美国Sigma公司);羊抗兔IgG二抗(美国Rockland公司);免疫组化试剂盒(美国Invitrogen公司)。

1.3 CD31蛋白免疫组化检测 采用免疫组化法检测甲状腺乳头状癌及癌周组织中CD31的表达情况。取临床标本石蜡切片梯度脱蜡水化后，以3%过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后进行微波抗原修复，山羊血清封闭20min后，依次经兔抗CD31多克隆抗体4℃孵育过夜，羊抗兔IgG 37℃孵育30min，SABC 37℃孵育20min，然后加入二氨基联苯胺(DAB)避光显色5min，最后经苏木素复染、乙醇梯度脱水、二甲苯透明后中性树胶封片。……