范 悦，商亚珍

(河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000)

神经胶质细胞是神经组织中除神经元以外的另一大类细胞，广泛分布于中枢神经系统和周围神经系统。中枢神经系统胶质细胞有星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞，其中星形胶质细胞数量最多，几乎囊括了所有胶质细胞的功能。星形胶质细胞与神经元之间存在复杂的相互作用，以维持神经系统内环境的稳定，对神经元的生存、正常中枢神经系统生理发育及病理过程都具有重要作用[1-2]。本研究探讨了如何建立实验室内可行的获得高纯度星形胶质细胞的体外培养方法，以期为星形胶质细胞的生物学研究提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 试剂 DMEM-F12培养基，美国GIBCO公司;胎牛血清，奥地利PAA公司;胰蛋白酶，华美生物工程有限公司;纤维酸性蛋白(GFAP)一抗，北京中杉金桥生物技术有限公司;羊抗兔二抗试剂盒、DAB显色试剂盒，武汉博士德生物工程有限公司。

1.2 星形胶质细胞原代培养 新生1-3d的SD大鼠，雌雄不限。剪开皮肤和颅骨，取两块皮质，预冷PBS漂洗1-2次后，仔细剥除脑膜和血管。剪碎，加入0.125%胰蛋白酶置于37℃培养箱中消化30min,消化完全后加入含20%胎牛血清的培养液终止消化。3500r/min离心5min，弃上清，计数，以2×105个/ml的密度接种于用0.1%多聚赖氨酸铺底的培养瓶中。30min后轻轻翻转培养瓶，吸出未贴壁的细胞悬液，重新接种于多聚赖氨酸包被的培养瓶中，差速贴壁以除去成纤维细胞。37℃、5% CO2培养箱培养，每3d换液一次。……