杨华伟，刘剑仑，李景涛，刘起鹏，韦 薇，唐 玮，蒋 奕

（广西医科大学附属肿瘤医院乳腺科，南宁530021）

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其复发转移是乳腺癌死亡的最主要原因［1］。近年来的研究发现，赖氨酰氧化酶（lysyl oxidase，LOX）的表达异常与乳腺癌的侵袭转移密切相关［2］。但LOX在乳腺癌侵袭转移中的作用机制尚不清楚。本研究组前期结果提示，LOX可以促进乳腺癌的侵袭转移，LOX基因在高侵袭潜能的乳腺癌细胞MDA-MB-231中高表达，在低侵袭性MCF-7细胞中低表达［3］。本研究通过构建LOX慢病毒干扰载体（LOX-RNAi-LV），抑制高侵袭转移乳腺癌细胞MDA-MB-231中LOX基因表达，并检测LOX、基质金属蛋白酶-2（matrixmetalloproteinases-2，MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和 低 氧 诱 导 因 子-1α（hypoxia-inducible factor-1α（HIF-1α）的表达变化，通过乳腺癌裸鼠移植瘤模型分析LOX蛋白与MMP-2、MMP-9及HIF-1α蛋白相关性，探讨LOX在乳腺癌侵袭转移中可能的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 人乳腺癌细胞MDA-MB-231购于南京凯基生物技术有限公司；人乳腺癌MCF-7细胞由广西医科大学基础实验室馈赠；LOX-RNAi-LV由上海吉凯基因化学技术有限公司构建包装；Trizol Reagent购自美国Invitrogen公司；Quant SYBR Green PCR试剂盒为北京TianGen公司产品；PCR引物由上海生工生物工程有限公司合成；荧光定量PCR为美国Bio-Rad，iQTM5Multicolor；LOX兔抗人多克隆抗体购自美国Novus生物公司；病理图像分析仪DMR＋550为德国莱卡公司。

1.2 LOX-RNAi-LV的构建 由Ambition公司设计、合成针对人LOX基因的siRNA，序列如下，上游引物：GGA ACU UUA GUG AAA CAU AAU，下游引物：UAU GUU UCA CUA AAG UUC CAG。合成含干扰序列的双链DNA oligo，其两端含酶切位点粘端，直接连入酶切后的载体pGCL-GFP（含U6启动子）上。验证后进行病毒包装，检测滴度和复感染指数后进行细胞转染干扰实验。……