不同浓度的磷酸盐缓冲液 (pH7.4)对血塞通注射液稳定性的影响

2013-03-02赵嵩月张要武

中国民族民间医药 2013年5期

赵嵩月陈彤* 赵洪张要武郭燕

1.昆明医科大学药学院，云南昆明 650500;2.云南云科药业有限公司，云南昆明 650033

血塞通注射液是以三七提取物——三七总皂苷为药效成分的中药注射液，用于中风偏瘫、瘀血阻络证;动脉粥状硬化性脑梗塞、脑栓塞、视网膜中央静脉阻塞属瘀血阻络证者，疗效显著，广泛用于心脑血管疾病的治疗，但临床不良反应时有报道［1－5］。三七总皂苷在酸性和强碱性条件下，易发生水解脱糖基，生成极性小的甙元［6］。前期研究发现血塞通注射液的最适宜pH为6－8［7］，加入磷酸盐缓冲液 (pH7.4)能提高血塞通注射液的稳定性，本实验将进一步考察磷酸盐缓冲液 (pH7.4)的浓度对血塞通注射液稳定性的影响。

1 材料

1.1 仪器 2010AHT高效液相色谱仪 (日本岛津);天精STY－1渗透压测定仪 (天津天大天发科技有限公司); CP225D电子天平 (北京塞多利斯仪器有限公司);101A－2E型电热鼓风干燥箱 (上海实验仪器厂有限公司); SK3300HP型超声波清洗仪 (上海科导超声仪器有限公司);PHS－25型PH计(上海雷磁仪器厂);0.22μm针前滤器(天津津腾公司)。

1.2 试药色谱纯甲醇 (德国默克公司);色谱纯乙腈(德国默克公司);分析纯盐酸 (重庆川东化工集团有限公司化学试剂厂);分析纯氢氧化钠 (天津市化学试剂三厂);磷酸二氢钠(国药集团化学试剂有限公司);三七皂苷R1对照品 (中国药品生物制品检定所，批号:101021 );人参皂苷Rg1对照品 (中国药品生物制品检定所，批号:101021);人参皂苷Rb1.对照品(中国药品生物制品检定所，批号:101021);三七总皂苷 (云南云科药业有限公司提供，批号:101003)。

2 方法

2.1 血塞通注射液中三个有效成分的含量测定方法按照血塞通注射液质量标准中［8］含量测定项下的方法测定注射液中R1、Rg1以及Rb1的含量。

2.1.1 色谱条件色谱柱:日本岛津 VP－ODS C18柱(150mm×4.6mm);流动相:A:乙腈，B:水 (0－20min A;20，B:80;21－26min A:40，B:60;26－30min A:20，B:80);流速:1.0ml·min－1;检测波长: 203nm;进样量:10μl。

2.1.2 对照品溶液的制备分别取在60℃减压干燥2小时的R1对照品、Rg1对照品和Rb1对照品适量，分别精密称定，置10ml量瓶中，加90%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得 (制成每 1ml约含 R1 0.4mg、Rg1 1.5 mg、Rb1 1.5 mg)。于HPLC仪上，进样10μl。

2.2 磷酸盐缓冲液的配制 (pH7.4) 精密称取磷酸二氢钠1.36 g，加入0.1 mol/L的氢氧化钠溶液79ml溶解后加新沸过的冷水定容至200ml即得。

2.3 不同浓度磷酸盐缓冲液 (pH7.4)的配制分别精密吸取2.2项下的磷酸盐缓冲液2ml、4ml、6ml、8ml、10ml、20ml、30ml、40ml、50ml，置200ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，得到浓度为 1%、2%、3%、4%、5%、10%、15%、20%、25%的磷酸盐缓冲液，分别用0.1mol/L的NaOH溶液调节pH值为7.4。

2.4 含不同浓度磷酸盐缓冲液 (pH7.4)的血塞通注射液配制分别称取三七总皂苷约7.5g，共9份，精密称定，称取氯化钠1.2g置烧杯中，分别精密量取上述不同浓度的磷酸盐缓冲液150ml，加热溶解，放冷至室温，调节pH至7.4，分别用0.22μm的针前滤器过滤后注入10ml安瓿中，将安瓿熔封。

2.5 高温试验取上述2.4项下的血塞通注射液，置于温度为80℃ 的干燥箱中，于第0天、第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天取样，放置至室温，摇匀，精密吸取1ml溶液至10ml的量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，于HPLC仪上，进样10μl。测定R1、Rg 1和Rb1的含量。