苏哲君，马 莉，陈志宏

(1.承德医学院附属医院，河北承德 067000;2.承德医学院)

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)常见的严重微血管并发症，是导致慢性肾功能不全的重要原因之一[1]。目前，DN的发病机制尚未完全明了，有研究认为，高血糖或血脂代谢紊乱作为启动因素，诱导各种血管活性物质、生长因子、细胞介质和蛋白质等，多种因素综合作用导致了DN的发生、发展，最终由于细胞外基质(extracellular matrix，ECM)过度积聚引发肾小球硬化和肾间质纤维化，治疗十分困难[2]。因此，深入探讨DN的发生机制具有十分重要的意义。

1 材料与方法

1.1 实验动物分组 清洁级雄性SD大鼠24只(河北医科大学实验动物学部，合格证号:712024)，随机分为正常对照组和糖尿病模型组，每组12只。正常对照组:大鼠常规饲养，不做任何处理;糖尿病模型组:小剂量(25mg/kg)链脲佐菌素(2%)连续腹腔注射(3d)建立糖尿病大鼠模型，7d后以空腹血糖≥16.7mmol/L作为成模标准[3]，待模型成功建立后，大鼠不再做任何处理。

1.2 检测血糖 各组大鼠禁食12h后，4%水合氯醛腹腔注射麻醉，经内眦于眶后静脉丛采血，3000r/min离心20min，收集血清，采用葡萄糖氧化酶法检测各组大鼠的血糖。

1.3 检测肾脏色素上皮衍生因子的表达 大鼠取血后断头处死，取肾脏入液氮保存。采用Western Blotting法检测肾脏色素上皮衍生因子(pigment epthelium-derivedfactor，PEDF)蛋白的表达:取200mg肾脏，提取蛋白后用BCA蛋白定量试剂盒(北京泰格美科技有限公司)定量蛋白浓度，蛋白上样量60μg;12% SDS-PAGE凝胶电泳、转膜，兔抗PEDF抗体(武汉博士德生物技术有限公司)稀释浓度1:200，4℃孵育过夜;Super ECL Plus超敏发光液显影。……