陈利明 杨红兵 陈海英 郭秋红

(河北省蔚县人民医院外科，河北 蔚县 075700)

实验研究

富硒灵芝对实验性高脂血症大鼠血脂和一氧化氮、内皮素水平的影响※

陈利明 杨红兵 陈海英1郭秋红2

(河北省蔚县人民医院外科，河北 蔚县 075700)

目的 观察富硒灵芝对高脂血症大鼠血脂和一氧化氮(NO)、内皮素(ET)水平的影响，探讨其治疗高脂血症的作用机制。方法 将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、富硒灵芝高剂量组、富硒灵芝低剂量组、吉非罗齐阳性药对照组，各10只。采用喂养高脂饲料方法复制高脂血症大鼠模型，在造模同时各组每日灌胃予药物(或水)治疗，连续8周。第8周末各组大鼠末次给药后禁食禁水12 h，断头取血，测定各组大鼠血脂、血清NO、血浆ET的水平。结果 与正常对照组比较，模型对照组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、ET水平显著升高(P＜0.01)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)、NO水平显著降低(P＜0.05);与模型对照组比较，各治疗组均可降低高脂血症大鼠TC、TG、NO水平(P＜0.01)，升高HDL－C、NO水平(P＜0.05);各治疗组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。结论 富硒灵芝可以调节大鼠脂质代谢的异常，缓解高脂血症所引起的ET和NO的失衡。

疾病模型，动物;芝;药理学;高脂血症;血脂;一氧化氮;内皮素

高脂血症(hyperlipoidemia，HLP)是一种全身脂密度代谢异常的病症，它会导致脂质增加、血脂比例改变和(或)脂质质量异常、血管内皮细胞损伤、内皮素(ET)的合成及释放增加、一氧化氮(NO)合成减少等。因此，如何切实有效的防治高脂血症对人体的危害，已成为一个很重要的研究课题。我们通过观察富硒灵芝对高脂血症的防治作用，以期寻找抗高脂血症损伤的有效药物。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 成年健康雄性SD大鼠50只，体质量180～200 g，河南实验动物基地提供，合格证号:SCXK (鄂)2004－0007。

1.1.2 动物饲料 普通饲料由河北省实验动物中心提供。高脂饲料［1］:胆固醇1.5%、胆盐0.5%(均购自北京奥博星生物技术责任有限公司)、普通饲料88%、猪油10%。高脂饲料由河北省实验动物中心加工制作。

1.1.3 实验药物及试剂 在液体培养基中加入亚硒酸钠培养出富硒灵芝(含硒量为4.32 mg/g)［2］，课题组实验室培养，80℃烘干，超微粉碎备用。吉非罗齐(山西创隆制药有限公司，国药准字 H14020050，生产批号为20071101)。总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)及NO试剂盒由南京建成生物工程研究所提供;ET测试盒由北京东亚免疫技术研究所提供。

1.2 实验方法

1.2.1 造模与给药 50只大鼠自由饮水进食，饲养于18～22℃明暗各12 h的清洁级动物实验室内，喂养1周后，随机分为5组，各组10只。①正常对照组:普通饲料喂养，每日凉开水1 mL/100 g灌胃1次。②模型对照组:高脂饲料喂养，每日凉开水1 mL/100 g灌胃1次。③吉非罗齐阳性药对照组(简称吉非罗齐组):高脂饲料喂养，每日吉非罗齐混悬液(含药量1.05 g/100 mL)1 mL/100 g灌胃1次。④富硒灵芝低剂量组(简称低剂量组):高脂饲料喂养，每日富硒灵芝(含药量2 g/100 mL)1 mL/100 g灌胃1次。⑤富硒灵芝高剂量组(简称高剂量组):高脂饲料喂养，每日富硒灵芝(含药量8 g/100 mL)1 mL/100 g灌胃1次。各组均自由饮水，连续8周，第8周末各组大鼠末次给药后禁食禁水12 h，断头取血。

1.2.2 检测方法 TC、TG、HDL－C、NO检测均采用酶法;ET检测采用放射免疫法。

1.2.3 统计学方法 应用统计软件(SPSS 11.5 for windows)进行数据的输入和计算，计量资料以均数±标准差±s)表示，多组均数比较用单因素方差分析法(Oneway ANOVA)。

2 结果

2.1 各组大鼠血清TC、TG及HDL－C比较 见表1。

表1 各组大鼠血清TC、TG及HDL－C比较 mmol/L，±s

表1 各组大鼠血清TC、TG及HDL－C比较 mmol/L，±s

与正常对照组比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01;与模型对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01

组别 n TG TC HDL－C正常对照组10 0.65±0.10 2.13±0.50 1.11±0.59模型对照组 10 1.59±0.64＊＊ 3.27±0.32＊＊ 0.60±0.23*低剂量组 10 1.03±0.29△△ 2.68±0.41△△ 1.09±0.47△高剂量组 10 0.87±0.33△△ 2.74±0.50△△ 1.11±0.31△吉非罗齐组 10 0.75±0.22△△ 2.49±0.29△△ 1.03±0.34△

由表1可见，与正常对照组比较，模型对照组血清TC、TG水平显著升高(P＜0.01)，HDL－C水平显著降低(P＜0.05)，表明高脂血症大鼠造模成功;与模型对照组比较，各治疗组均可降低高脂血症大鼠TC、TG水平(P＜0.01)，升高HDL－C水平(P＜0.05);各治疗组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 各组大鼠血清NO、血浆ET比较 见表2。

表2 各组大鼠血清NO、血浆ET比较 ±s

表2 各组大鼠血清NO、血浆ET比较 ±s

与正常对照组比较，*P＜0.01;与模型对照组比较，△P＜0.05

组 别 n NO(mg/L) ET(ng/L)正常对照组10 67.08±11.97 139.24±40.41模型对照组 10 30.22±9.44* 189.96±28.72*低剂量组 10 43.34±10.61△ 153.09±37.64△高剂量组 10 42.85±18.66△ 150.17±31.05△吉非罗齐组 10 49.98±13.69△ 155.73±32.59△

由表2可见，与正常对照组比较，模型对照组NO水平显著降低(P＜0.01)，ET水平显著升高(P＜0.01);与模型对照组比较，各治疗组均可显著升高NO水平(P＜0.05)，显著降低ET水平(P＜0.05);各治疗组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

3 讨论

硒是人体谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)的组成成分，是人体必需的微量元素。人体的硒主要来源于食物，从营养学和生化代谢角度考虑，生物源有机硒以其吸收利用率高、毒副作用小等特点优越于无机硒。灵芝是药食两用菌，对增强机体免疫力、抗癌、抗肿瘤方面研究也早有报导［3］。灵芝对某些微量元素特别是硒具有高度的富集作用，并把无机硒转化为有机硒，利于人体摄入。本实验采用的富硒灵芝是灵芝在加硒深层培养中，对无机硒进行生物转化而成为富含生物有机硒的灵芝。本实验是以血脂、NO、ET为观察指标来探讨富硒灵芝对高脂血症的治疗作用。

高脂血症是一种脂代谢紊乱病症，它会造成血中TC、低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)水平及甘油三酯(TG)水平过高和(或)HDL－C水平过低。根据实验结果，富硒灵芝能较好地降低血清TC、TG水平，升高HDL－C水平，说明富硒灵芝能调节脂质代谢的异常。

正常生理条件下，NO和ET由血管内皮细胞(EC)合成和释放，这两类物质相互拮抗，互相调节，共同维持血管功能。1980年Furchgott RF等［4］首次发现的血管内皮舒张因子，现已证实为NO或其类似物。NO由L－精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)的催化下合成，生成的NO以游离或复合物形式由EC释放。NO激活细胞内的鸟苷酸环化酶，使胞内环磷酸鸟苷(cGMP)增高，而产生一系列生物学效应:①松弛血管平滑肌，维持血管舒张状态。②抑制血小板的黏附和聚集，影响白细胞黏附分子CD11、CD18的活性或抑制其表达。③抑制平滑肌细胞分裂增殖，减少胶原纤维、弹力纤维的产生。④携带额外电子，清除自由基，抑制脂质过氧化反应［5－6］。

ET是迄今发现的最强烈的内皮源性缩血管活性多肽，含有21个氨基酸残基，有ET－1、ET－2、ET－3 3种亚型，分别有不同基因编码［7］。EC是合成分泌ET的主要细胞，ET在EC粗面内质网合成，作用于平滑肌［8］。ET受体有ETA受体和ETB受体2种亚型。ETA受体主要存在于血管平滑肌细胞，激动后引起平滑肌细胞的收缩。而EC上的ETB受体激动后可以诱发前列环素(PGI2)和NO的释放引起平滑肌松弛，并能抑制ET的分泌，形成负反馈调节［9］，即正常生理状态下，EC合成和释放的NO和ET相互作用与调节，保持着动态平衡。高脂血症时EC受损，打破此平衡，可加重内皮损伤。有研究表明NO活性下降是高胆固醇血症最早出现的异常改变［10］，NO活性降低主要是由于动脉内皮氧自由基(OFRs)形成增多，使NO氧化降解增加［11］。

本实验模型组大鼠高脂饲料喂养8周后，血清NO水平显著降低，血浆ET水平升高，表明食饵性高脂血症引起血管内皮细胞功能损伤。用药组均不同程度地升高血清NO水平，降低血浆ET水平，表明富硒灵芝能缓解高脂血症引起的血浆ET和NO的失衡，对EC具有一定的保护作用。富硒灵芝组与吉非罗齐组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。我们推测其机制可能为:硒作为人体必需微量元素，具有保护机体免受氧化损害的功能。物质在体内代谢过程中会产生许多氧化活性很强的代谢产物，如过氧化氢(H2O2)、超氧阴离子(O2－)、羟游离基(HO)及脂酰游离基(ROOH)等，这些代谢产物在体内可氧化脂肪酸和蛋白质，损害生物膜和细胞的功能结构。硒通过增强GSH－Px的活性，催化氧化型谷胱甘肽(GSSG)还原为还原型谷胱甘肽(GSH)，使生物膜和细胞免遭自由基的损害而减轻脂质过氧化反应。

本实验选用富硒灵芝作为对抗高脂血症的药物，确实可以使高脂血症大鼠血清TC、TG，血浆ET水平显著低于模型组(P＜0.01，P＜0.05)，血清HDL－C、NO水平显著高于模型组(P＜0.05)。实验结果表明，富硒灵芝可以调节大鼠脂质代谢的异常，缓解高脂血症所引起的ET和NO的失衡。总之，富硒灵芝可以有效地防护高脂血症所造成的损害。

［1］应力，姜春萌，王朝晖，等.甘正复方对大鼠非酒精性脂肪肝的影响［J］.中国中西医结合消化杂志，2006;14(1):30－33.

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Effects of Ganoderma lucidum rich in selenium on levels of NO and ET in blood of rats with hyperlipoidemia

CHEN Liming*，YANG Hongbing，CHEN Haiying，et al.*Department of Surgery，Yu County People＇s Hospital of Hebei，Hebei，Yu County 075700

ObjectiveTo explore the mechanism of action by observing the effect of Ganoderma lucidum rich in selenium on levels of NO and ET of rats with hyperlipoidemia.Methods50 rats were randomly divided into 5 groups:the normal control group，the model group，the high－dose of Ganoderma lucidum rich in selenium group，the low－dose of Ganoderma lucidum rich in selenium group and Gemfibrozil positive control group.The animal models of hyperlipoidemia were duplicated with high fat diet.Each

daily oral administration of drugs(or water) treatment for 8 weeks while modeling.At 8th week after the last administration the rats received fasting for 12h，decapitated，blood.The levels of blood fat and NO，ET in each group were detected.ResultsCompared with the normal control group，the levels of TC，TG and ET(P＜0.01)were significantly increased and the levels of HDLC and NO were obviously decreased(P＜0.05)in the model group.Compared with the model group，the levels of TC，TG and ET(P＜0.01)were significantly decreased and the levels of HDL－C and NO were obviously increased (P＜0.05)in each treatment group.There was no significant difference among each treatment group(P＜0.05).ConclusionGanoderma Lucidum rich in selenium can effectively regulate the abnormality of blood fat，and relieve the unbalance of ET and NO in blood of rats with hyperlipoidemia.

Disease model;Animal;Ganoderma lucidum;Pharmacology;Hyperlipemia;Blood lipid;Nitric oxide;Endothelin

R－332;R589.2;R282.710.5

A

1002－2619(2012)08－1221－03

※项目来源:河北省中医药管理局2006年度中医药、中西医结合科研计划(编号:2006064)

1 河北医科大学基础课教学部，河北 石家庄 050091

2 河北医科大学中医学院中药临床教研室，河北 石家庄 050091作者简介:陈利明(1964—)，男，副主任医师，学士。研究方向:心脑血管病。

2012－01－09)