梁 莉 刘洪臣 鄂玲玲 王东胜

牙周炎是一种口腔常见的细菌感染性疾病，牙周致病菌是通过多种炎性因子和细胞毒性作用产生对牙周组织的破坏性影响，导致牙周组织中的RANKL/RANK/OPG调节系统失衡，最终造成牙周膜、牙槽骨破坏[1]。IL-6是一种多功能的细胞因子具有许多和牙周炎发病机制相关的活性。内皮素-1(endothelin-1，ET-1)作为一种缩血管肽具有多种功能，与各种细胞因子之间存在复杂的联系，研究表明[2]，ET-1与牙周炎的发生有极为密切的关系而且参与了细胞因子的调节，但ET-1在牙周炎发病机制中的作用机理尚不清楚。因此，我们通过研究ET-1对牙周膜细胞IL-6表达的影响，为探讨ET-1在牙周炎发病机制中的作用机理奠定基础，进而为寻求治疗牙周炎提供可能的途径。

1.材料和方法

1.1主要试剂 内皮素-1(sigma，美国),DMEM培养基(Gibco，美国)，胎牛血清(FCS)(浙江金华清湖犊牛利用研究所)，胰蛋白酶(Gibco，美国)，DG-3022型酶联免疫监测仪(南京华东电子仪器厂)。

1.2人牙周膜细胞的培养[3]选取11-13岁因正畸需要而拔除的前磨牙，无菌条件下刮取牙根中1／3的牙周膜组织，剪成1.0mm×1.0mm×1.0mm小块，平铺于25m l培养瓶底，加入含10%FCS的DMEM 培养液，放入CO2孵箱，在37℃、5%CO2、100%湿度条件下培养，倒置显微镜下观察细胞生长情况。待细胞长至培养瓶底约80%时,即可按1∶2传代。弃去原培养基,用PBS洗涤一次,加入0.25%胰蛋白酶及0.2%EDTA 2m l消化。相差显微镜下观察,待大多数牙周膜细胞已收缩变圆且与瓶壁分离(约10m in)，加入含10%胎牛血清DMEM 终止反应。反复吹打后离心(800r/m in,5m in)。调整细胞密度，按4×105/瓶密度接种。取4-8代细胞进行实验。……