党 平 聂敏媛 董 亮 崔三哲 汤楚华 史 亮 郑翰圣 董 蕊 施生根

了解特异组织的特征基因表达谱被认为是未来再生医学成功修复中老年患者靶器官的关键步骤之一[1]。而近十年来，基因芯片等高通量手段对上述研究起到了极大的推动作用，被广泛应用于各种组织和细胞的基因特异表达谱研究[2]。但如果被研究细胞量少，或位于组织深部而受混杂细胞所干扰，目标细胞的特征基因表达往往会被其他无关组织基因表达的“噪声”所掩盖。激光显微切割(Laser m icrodissection，LMD)能让研究者从三维异质性组织中精确分离相对单一细胞群并提取其中核酸进行分析[3,4]。但制约该技术应用的问题之一即是激光切割过程可能对样品总RNA完整度带来的影响[5]，RNA的降解甚至会影响到对后续基因表达结果的解读[6,7]。

影响组织RNA降解的RNA酶分为外源性和内源性，实验准备阶段的用品和实验环境的准备是为了尽量消除外源性RNA酶的影响；而内源性酶的作用则与亲水环境关系密切。另外环境中过大湿度会影响激光切割效率，因此以乙醇预处理切割前的组织切片不失为一种简便易行的方法。既往文献曾有过用乙醇配置染色溶液和以不同乙醇条件预处理组织切片的报道[8,9]。

本研究比较以两种方式乙醇预处理未经染色的冰冻组织切片，考察其对后续提取小鼠牙胚组织样品总RNA完整度的影响。

1.材料和方法

1.1试剂和仪器 异戊烷(sigma，美国)，100%无水乙醇(Merck KGaA，德国)，OCT冷冻包埋剂(Shandon，英国)，无RNase水(Invitrogen，美国)，RNaseAWAY(Invitrogen，美国)，LMD6000显微切割系统(Leica，德国)，2100生物分析仪(Agilent，美国)。……