苟小兰 ，王 利 *，侯显耀 ，龙钟明 ，魏 勇 ，黄文明

（1.西南民族大学生命科学与技术学院，动物遗传育种学国家民委教育部重点实验室，四川 成都 610041；2.四川省南充市畜牧局，四川 南充 637600；3.四川省畜牧科学研究院，四川 成都 610066）

本试验观测了成都某丁鲑鱼养殖场的发病情况，发现病鱼主要表现为行动迟缓、体表鳞片大面积脱落、体表局部充血等症状，剖检可见主要脏器已发生不同程度病变。从病鱼体内分离得到了一株细菌，采用细菌常规分离培养方法、16S rDNA序列扩增分析及构建系统进化树，对该菌进行了鉴定和生物学特性研究，现报告如下。

1 材料和方法

1.1 样品来源 试验鱼来源于成都某丁鲑鱼养殖场，体长6.0cm，体重15.0g。

1.2 主要仪器及试剂 PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统；生化鉴定药品均购于杭州微生物试剂有限公司，麦康凯琼脂（北京奥博星生物技术有限责任公司生产），营养琼脂（北京奥博星生物技术有限责任公司生 产），TaqMix、DNA Marker DL2000， 购 自 Tiangen Biotech（Beijing）。

1.3 细菌分离培养 无菌操作下分别挑取丁鲑鱼肾脏、肝脏、心脏组织于麦康凯琼脂培养基上，28℃培养24 h，选取形态均一的优势菌群，挑取单菌落反复划线纯化，纯化所得菌株于4℃保存。再将保存菌株划线接种于营养琼脂平板上，28℃培养，观察菌落形态，挑取单个菌落进行革兰氏染色，在光学显微镜下观察菌体形态。

1.4 生理生化鉴定 将纯培养菌株穿刺接种于细菌生化特性鉴定管中，参照生化反应管使用说明书，对分离纯化培养物进行鉴定。

1.5 16S rDNA基因的扩增和测序 挑取单个菌落于灭菌水中，-80℃冻存1h后，立即置于100℃沸水浴20min，然后4℃ 12000r/min离心5min，取上清液作为PCR模板。……