黄仕文，戴启刚

（南京中医药大学，江苏南京210029）

《金匮要略》中主治阳气不足、阴寒痼结心下之胸痹之方乌头赤石脂丸由蜀椒、制川乌、制附子、干姜、赤石脂组成。前期实验研究使用异丙肾上腺素复制类似于冠心病、心绞痛等心肌损伤模型，结果表明乌头赤石脂丸能减轻大鼠心肌损伤，保护缺血心肌［1］。本实验拟以冰水游泳加注射垂体后叶素复制大鼠阳虚寒凝胸痹模型，检测胸痹大鼠血液黏度、血栓素 B2（TXB2）、6-酮-前列腺素 F1α（6-keto-PGF1α）、内皮素（ET）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）及丙二醛（MDA）活性，探讨乌头赤石脂丸保护寒凝胸痹大鼠损伤心肌的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 SD大鼠72只，（200±20）g，雌雄各半，由南京中医药大学动物中心提供，动物许可证号为SCXK（沪）2007-0005。

1.1.2 药品和试剂 乌头赤石脂丸中蜀椒、制川乌、附子、干姜、赤石脂按 2∶1∶1∶1∶2 取一定量，煎煮时先将制川乌、附子放入10倍总药量水中浸泡30 min后先煎1 h，再放入其他药煎煮30 min，过滤，药渣加8倍量水煎煮30 min，过滤，合并滤液，水浴浓缩至每毫升含生药1.0 g，4℃冰箱保存，备用；垂体后叶素，上海禾丰制药有限公司；NO、SOD、MDA试剂盒，南京建成生物技术有限公司；TXB2、ET、6-keto-PGF1α放免试剂盒，北京普尔伟业生物科技有限公司，由南京市第一人民医院白下区鑫园分院放免实验室检测。

1.1.3 实验仪器 酶标仪，赛默飞世尔科技；自动放免仪，中国科大中佳公司。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与给药 72只SD大鼠随机分为空白对照组，ADH模型组，乌头赤石脂丸低、中、高剂量组（给药量分别相当于人体等效剂量的1/3量即0.63 g/kg、等效量即1.89 g/kg、3倍量即5.67 g/kg），复方丹参滴丸组（给药量相当于人体等效剂量72.9 mg/kg）6组，每组12只。空白对照组、模型组大鼠灌胃生理盐水，其余各组灌胃相应药物，每日1次，连续2 w。

1.2.2 模型制备 参考文献［2］并结合预实验结果建立如下模型：除空白对照组外，其余各组大鼠每日灌胃30 min后，于0℃～4℃冰水中游泳3 min～5 min。于末次游泳结束后，除空白对照组外，其余各组腹腔注射垂体后叶素20 U/kg。

1.2.3 标本采集与指标检测 于注射垂体后叶素24 h后，所有大鼠用戊巴比妥钠麻醉，颈总动脉采血（所采血分三份，二份抗凝、一份不抗凝），不抗凝血常规分离血清，抗凝血一份分离血浆，一份留测全血黏滞度；按试剂盒说明书方法检测血清NO（硝酸还原酶法）、SOD（黄嘌呤氧化酶法）、MDA（TBA 法），放免法检测 TXB2、6-keto-PGF1α、ET活性。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 样本脱落

本实验在造模过程中除空白对照组外，其他每组均有死亡，其死亡数（即样本脱落数）及死亡率（即脱落率）见表1。

表1 各组大鼠样本脱落数及脱落率

由表1可以看出，各组样本脱落数与脱落率存在差异，从而说明相应的药物干预能够提高大鼠对寒冷刺激和ADH所致缺血损伤的耐受力。

2.2 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠全血及血浆黏度的影响结果见表2。

表2 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠全血及血浆黏度的影响 （mPa·s，s）

表2 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠全血及血浆黏度的影响 （mPa·s，s）

注：与空白对照组相比，1）P＜0.01，2）P＜0.05；与模型组相比，3）P＜0.01，4）P＜0.05

组别 n 全血黏度 血浆黏度1 s 5 s 30 s 200 s空白对照组 12 20.13±1.77 9.67±0.86 6.01±0.63 4.94±0.32 1.17±0.06模型组 7 28.63±4.271） 13.01±1.541） 7.73±0.711） 5.90±0.461） 1.22±0.032）低剂量组 10 23.37±1.263） 11.21±1.013） 6.78±0.493） 5.24±0.333） 1.17±0.044）中剂量组 9 20.02±2.673） 11.03±0.543） 6.74±0.303） 5.24±0.223） 1.13±0.053）高剂量组 8 16.78±3.963） 8.41±1.513） 5.42±0.743） 4.36±0.503） 1.12±0.023）复方丹参滴丸组 9 25.01±2.324） 11.62±1.004） 7.01±0.574） 5.40±0.434） 1.17±0.034）

由表2可见，与空白对照组相比，模型组不同切变率的全血及血浆黏度升高（P＜0.01，P＜0.05）；与模型组相比，各治疗组不同切变率的全血及血浆黏度均显著降低（P＜0.01，P＜0.05）。

2.3 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α 水平的影响

结果如表3。由表3可见，与空白对照组相比，模型组TXB2含量升高（P＜0.05），6-keto-PGF1α含量下降（P＜0.01）。与模型组相比，高、中剂量组TXB2含量显著降低（P＜0.01），高、低剂量组 6-keto-PGF1α含量升高（P＜0.01）。

表3 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α水平的影响 （s）

表3 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清TXB2、6-keto-PGF1α水平的影响 （s）

注：与空白对照组相比，1）P＜0.01；与模型组相比，2）P＜0.01

?

2.4 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影响

结果见表4。

表4 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影响 （s）

表4 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清ET、NO水平的影响 （s）

注：与空白对照组相比，1）P＜0.01；与模型组相比，2）P＜0.01，3）P＜0.05

?

由表4可以看出，与空白对照组相比，模型组ET值升高、NO值下降（P＜0.01）；与模型组相比，乌头赤石脂丸各剂量组、复方丹参滴丸组 ET含量显著降低（P＜0.01，P＜0.05），中、高剂量组 NO 含量升高（P＜0.01，P＜0.05）。

2.5 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影响

结果见表5。

表5 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影响 （s）

表5 乌头赤石脂丸对寒凝胸痹大鼠血清SOD、MDA水平的影响 （s）

注：与空白对照组相比，1）P＜0.01；与模型组相比，2）P＜0.05

?

由表5可见，模型组较空白对照组SOD含量降低（P＜0.01），与模型组相比，高剂量组 SOD 含量升高（P＜0.05）；MDA值各组间比较差异无统计学意义，尤其是正常组与模型组差异也无统计学意义，其原因值得进一步深究。

3 讨论

心肌缺血性损伤的发病机制主要有：氧自由基的作用、钙超载、微血管病变和细胞损伤等［3］。机体通过神经、体液、免疫等一系列因素进行调节，促进或改善心肌损伤状况。TXA2与PGI2是生物活性完全相反的血管活性物质，TXA2具有很强的诱导血小板聚集和血管收缩作用，而PGI2是内皮细胞合成并分泌的血管舒张因子，其主要作用抑制血小板的黏附与聚集，拮抗TXA2，使血管扩张。TXA2和PGI2的性质极不稳定，不易检测，而其相应的代谢产物血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）则较稳定，因此测定TXB2和6-keto-PGF1α的浓度，可反映TXA2和PGI2的含量。当血流动力学改变，可刺激血管内皮细胞分泌内皮素（ET）或一氧化氮（NO），ET是作用较强的血管收缩剂之一，而NO则具有较强的舒血管作用，两者改变可调节损伤心肌血供。心肌缺血后活化的中性粒细胞大量聚集在缺血区，加速了自由基的生成，导致氧自由基堆积，而活性氧自由基和细胞膜脂质发生反应，生成大量 MDA，并使抗氧化酶SOD含量降低，导致氧化与抗氧化系统失衡，清除自由基的能力降低，从而引起心血管组织严重损伤，因而SOD、MDA活性可反映机体抗氧自由基的能力。

本实验结果表明，乌头赤石脂丸各剂量组均能降低寒凝胸痹大鼠的全血或血浆黏度，改善寒凝胸痹大鼠的血液流变学，而对血清中活性因子的水平改变则存在差异。乌头赤石脂丸能增加TXB2的合成分泌、降低6-keto-PGF1α的合成分泌。乌头赤石脂丸能降低ET的合成分泌，提高NO、SOD的水平，对MDA水平无显著影响。

乌头赤石脂丸对冰水游泳加注射垂体后叶素所致的寒凝胸痹大鼠损伤心肌的保护作用可能主要是通过抑制血小板的黏附、聚集，刺激血管内皮细胞合成扩血管NO、抑制缩血管ET产生，从而降低血液黏滞度，改善血流动力学来实现的。

［1］戴启刚，汪受传，王忠山，等.乌头赤石脂丸对异丙肾上腺素所致大鼠心肌损伤的保护作用［J］.北京中医药大学学报，2011，34（11）：755-758.

［2］闫娟娟，高文远.黄芪桂枝五物汤对胸痹阳虚寒凝证大鼠的心电图和血清酶的影响［J］.上海中医药杂志，2009，43（1）：75-77.

［3］金惠铭，王建枝.病理生理学［M］.北京：人民卫生出版社，2010：141-155.