范超君，鲍长余，陈湛娟，毕和平，2*

（1.海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；

2.海南师范大学“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）

白千层枝和叶总黄酮含量的测定

范超君1，鲍长余1，陈湛娟1，毕和平1，2*

（1.海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；

2.海南师范大学“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）

以芦丁为对照品，NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色系统，用紫外分光光度法，在498 nm波长测定白千层枝和叶中总黄酮的含量.结果显示，其回归方程为A=0.01022C+0.0165，r=0.9995，吸光度在0～100 mg/L范围内呈良好线性关系.测定结果表明，白千层枝和叶中总黄酮的质量分数分别为0.69%和0.63%.

白千层；总黄酮；紫外分光光度法

白千层（Melaleuca leucadendronLinn.）又名千层皮、脱皮树、玉蝴蝶、玉树等，为常绿乔木，树皮灰白色，厚而疏松，属桃金娘科（Myrtaceae）白千层属（Melaleuca）植物，我国福建、海南、广东、广西、台湾等均有分布.白千层叶具芳香解表，祛风止痛等功效，用于感冒发热，牙痛、风湿关节痛，神经痛，肠炎腹泻，外用治过敏性皮炎，湿疹等[1-3].从白千层属的枝和叶中提取的芳香油具有抗菌、消毒、止痒、防腐等作用，是洗涤剂、美容保健品等日用化工品和医疗用品的主要原料之一，需求广泛.近年来，文献主要研究了不同产地、不同品种的白千层属的挥发油成分[4-5]，未见有对白千层黄酮类含量测定的报道.黄酮类化合物具有抗炎镇痛、抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗病毒、免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗辐射、抑菌等作用[6-7].为开发利用白千层属药用植物提供科学依据，本文以芦丁为对照品，以Na⁃NO2-Al（NO3）3-NaOH为显色体系，采用紫外分光光度法测定了海南产白千层枝和叶中总黄酮的含量.

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

UV2600紫外分光光度计（上海国美科学仪器有限公司）；EYEL4OSB-2100旋转蒸发仪(日本东京理化)；FA1604型电子天平（上海精科天平厂）；索氏提取器（自制）.

芦丁对照品（北京北纳生物技术研究院，纯度大于99.5%），甲醇、石油醚、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝等均为国产分析纯.

白千层于2011年7月采集于海南师范大学校园内，经海南师范大学生命科学学院钟琼芯高级实验师鉴定为白千层（Melaleuca leucadendronLinn.）的枝和叶.

1.2 白千层枝和叶中总黄酮的提取

将干燥并粉碎过的白千层枝和叶各准确称取2.00 g，加入300 mL石油醚，索氏法提取至无色，挥干石油醚，再用甲醇提取至提取液无色.浓缩提取液并分别用甲醇定容于50 mL容量瓶中，即得总黄酮供试品溶液.

1.3 标准曲线的绘制

精密称取芦丁标准品10.0 mg，溶解后，用甲醇定容于50 mL的容量瓶中，得到浓度为0.2 mg/mL的标准品溶液.参照文献[8-12]，准确吸取芦丁对照品溶液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置于6个10 mL容量瓶中，各加甲醇至5 mL，再分别加入质量分数为5%的NaNO2溶液0.5 mL，摇匀放置8 min后，分别加入质量分数为10%的Al（NO3）3溶液0.5 mL，摇匀放置8 min，再分别加入质量分数为4%的NaOH溶液4.0 mL，摇匀放置15 min后，在498 nm波长处测定溶液的吸光度值A，同时进行空白对照.以芦丁对照品溶液浓度C（μg/mL）为横坐标，溶液的吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线图.

2 结果与讨论

2.1 测定波长的选择

精密吸取芦丁对照品溶液3.0 mL于10 mL的容量瓶，加甲醇至5 mL，余下按1.3项操作，在波长为400～600 nm的范围内进行波长扫描（见图1），实验证明，对照品溶液在498 nm处有最大吸收峰，故选择波长498 nm作为白千层枝和叶提取液中总黄酮含量的测定波长.

图1 波长扫描曲线Fig.1Wavelength scanning curve

2.2 标准曲线与回归方程

按1.3项所述方法测定对照品吸光度，得到标准曲线，见图2.结果表明，对照品浓度在0～100 mg/L的范围内线性关系良好，其线性回归方程为A=0.01022C+0.0165，r=0.9995.

图2 标准曲线图Fig.2Standard curve

2.3 稳定性实验

精密量取对照品溶液和样品溶液各3.0 mL，按1.3项下方法处理，每隔5 min测定1次吸光度，结果表明，在测定时间5～80 min内，吸光度值A基本稳定.

2.4 精密度实验

精密量取白千层技和叶提取液，按1.3项方法处理，平行操作5次，分别测定吸光度A，结果见表1.白千层枝和叶提取液的测定相对标准偏差RSD分别为0.66%（n=5）和0.48%（n=5），精密度良好.

表1 精密度实验Tab.1 Precision test

2.5 白千层总黄酮含量测定

精密量取白千层枝和叶样品溶液各3份，每份3.0 mL，按1.3项所述方法处理，在498 nm波长处测定吸光度，结果见表2.结果表明，白千层枝的总黄酮质量分数为0.69%，相对标准偏差RSD=0.83%；叶的总黄酮质量分数为0.63%，RSD=0.90%.

2.6 加标回收率实验

精密量取白千层枝、叶的提取液各5份，每份3.0 mL，准确加入一定量的芦丁对照品，按1.3项方法处理，结果见表3.白千层枝和叶提取液的平均加样回收率分别为99.91%，RSD=0.17%（n=5）和99.99%，RSD=0.036%（n=5）.

表2 样品黄酮含量Tab.2 Determination results of total flavonoid in the stems and leaves

表3 加样回收率实验Tab.3Recovery test

3 结论

以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH体系为显色剂，采用紫外分光光度法，测定海南产白千层枝和叶中总黄酮的含量，结果表明，白千层叶中总黄酮的总质量分数为0.63%，枝中总黄酮的总质量分数为0.69%.该法操作简便，精密度高、重复性好，结果稳定可靠.本文方法可用于白千层药材的总黄酮含量的测定和质量控制.

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Determination of Total Flavonoid Content in the Stems and Leaves of Melaleuca leucadendron Linn

FAN Chaojun1，BAO Changyu1，CHEN Zhanjuan1，BI Heping1，2＊
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Haikou571158，China）

The total flavonoids content in the stems and leaves of Melaleuca leucadendron Linn was determined by spectrophotometry with rutin standard and NaNO2-A（lNO3）3-NaOH system.The regression equation wasA=0.01022C+0.0165（r=0.9995）.The results showed that the mass fractions of total flavonoid in the stems and leaves were 0.69%and 0.63%respectively.The method was stable,accurate,reproducible,highly sensitive and thus was a realistic and practi⁃cal approach for determining flavonoid content of Melaleuca leucadendron linn.

Melaleuca leucadendron Linn.；flavonoid ；ultraviolet spectrophotometric method

R 284.1

A

1674-4942（2012）01-0063-03

2012-01-08

海南师范大学国家大学生创新实验项目（101165804）

*通讯作者

黄 澜