柴丹丹，李庆华，阎赟梦，毛丽红，李 靓，朱立强，薛乐勋#

1)郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州 450001 2)郑州大学第二附属医院检验科郑州 450014

#通讯作者，男，1944年2月生，教授，博士研究生导师，研究方向:肿瘤标志物与基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cn

杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测*

柴丹丹1)，李庆华1)，阎赟梦1)，毛丽红1)，李 靓1)，朱立强2)，薛乐勋1)#

1)郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州 450001 2)郑州大学第二附属医院检验科郑州 450014

#通讯作者，男，1944年2月生，教授，博士研究生导师，研究方向:肿瘤标志物与基因工程，E-mail:xuelx@zzu.edu.cn

S腺苷高半胱氨酸水解酶;酵母双杂交;诱饵载体;自激活;杜氏盐藻

目的:构建杜氏盐藻S腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHH)的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-SAHH，并检测其对酵母细胞的毒性和自激活作用。方法:应用RT-PCR扩增杜氏盐藻的SAHH cDNA，测序分析后与酵母双杂交诱饵载体pGBKT7连接，构建诱饵载体pGBKT7-SAHH。用PEG/LiAc法将诱饵载体转入AH109和Y187酵母中，通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母有无毒性和自激活作用。结果:成功构建了诱饵载体pGBKT7-SAHH并成功转化到酵母细胞AH109和Y187中，表达的融合蛋白对宿主酵母细胞无毒性。在AH109和Y187酵母细胞中诱饵载体均未激活报告基因HIS3和ADE2，但是激活了报告基因MEL1。结论:诱饵载体pGBKT7-SAHH可用酵母双杂交方法筛选与SAHH相互作用的蛋白。

*国家自然科学基金资助项目 30700014;科技部国际科技合作基金资助项目 2007DFA01240

在真核生物中，S腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl methionine，SAM)依赖性甲基转移酶催化的甲基化反应是最重要的甲基化通路，反应生成S腺苷高半胱氨酸(S-adenosyhomocystine，SAH)。……