宋新强，骆 媛，李倩倩，董晶晶，甘小青，马 云

1)信阳师范学院生命科学学院免疫学教研室信阳464000 2)军事医学科学院附属医院北京100071

(2011-03-25收稿 责任编辑 李沛寰)

研究［1-3］表明抗原递呈细胞(antigen presenting cell，APC)直接与抗原特异的T细胞接触能够诱导出特异的耐受性APC，这种APC会特异地抑制自身反应性T细胞，所以，使用这种耐受性APC治疗T细胞介导的自身免疫性疾病有潜在的临床应用价值。胶原诱导的关节炎(collagen induced arthritis，CIA)是目前国际上公认的关节炎模型。由于胶原不溶于水，一般使用弱酸来溶解，为避免溶解胶原所使用的醋酸影响细胞的生长，作者用胶原上的抗原肽表位(collagen tolerance epitope，CTE)1和 CTE2(即T细胞决定簇)代替胶原刺激APC，拟利用TGF-β处理和CTE诱导的APC来探索治疗关节炎的疗效，希望为临床治疗类风湿关节炎摸索出一种全新的策略。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器 肿瘤生长因子(tumor growth factor-β，TGF-β2)、鸡Ⅱ型胶原(Type Ⅱ collagen，CⅡ)、佛波醇酯、离子霉素和蛋白转运抑制剂莫能菌素均购自美国Sigma公司;FITC标记的抗IFN-γ单克隆抗(mAb)、PE标记的抗IL-4 mAb均购自美国BD公司，流式细胞分析仪由美国BD公司制造。CTE1和CTE2根据文献［4］的方法表达、纯化获得。

1.2 免疫性APC与耐受性APC的获得 免疫性APC与耐受性APC参考文献［5］通过体外诱导产生。Wistar大鼠腹腔注射6 mL 30 g/L的巯基乙酸盐溶液，3 d后收集腹膜渗出细胞(peritoneal exudate cell，PEC)。PEC 在含 500 mg/L CTE 和 5 μg/L TGF-β2的无血清培养液中过夜，即获得耐受性APC;培养液中不加TGF-β2，获得免疫性 APC。培养后，细胞用Hanks平衡盐溶液(HBSS)洗3次，除去CTE和TGF-β2，贴壁细胞在4℃PBS中培养2 h后，用移液管吹起，用HBSS洗3次并重悬，调整最终浓度为1 ×107L－1。

1.3 动物模型的建立与分组 雌性Wistar大鼠购于北京军事医学科学院动物中心，体质量(190±15)g，饲养在清洁级环境中。……