李 江，万鼎铭

1)郑州大学第一附属医院血液科郑州450052 2)河南职工医学院内科教研室郑州451191

(2011-05-20收稿 责任编辑 王 曼)

抗凋亡基因BAG-1是Bcl-2结合抗凋亡基因(Bcl-2 associated athanogene，BAG)家族的重要成员之一［1］。近年来研究［2-4］表明，BAG-1 在多种恶性肿瘤组织中表达上调，但其在急性白血病(acute leukemia，AL)中的表达情况少见报道。Bcl-2与多种肿瘤的发生发展有关［5-7］。作者采用免疫细胞化学染色方法检测AL患者骨髓单个核细胞中BAG-1及Bcl-2蛋白的表达情况，分析BAG-1表达与AL临床特征的关系，探讨BAG-1在AL发生发展中的作用。

1 对象与方法

1.1 研究对象 收集2006年5月至2010年5月郑州大学第一附属医院血液科门诊及住院AL和非恶性血液病患者的骨髓标本。患者均经骨髓细胞形态学、免疫细胞化学染色法及流式细胞术确诊，符合FAB白血病分型标准。初治AL患者112例，年龄17～68岁，中位年龄 37岁;复发难治白血病(RRAL)29例，完全缓解期急性白血病(AL-CR)57例，正常对照20例。

1.2 标本采集 采集入选对象的骨髓1 mL，EDTA抗凝，并于当天以Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞，调整细胞数至(1～2)×106mL－1，制备细胞涂片，室温风干后多聚甲醛固定20 min，PBS冲洗5 min×3次，晾干，保存于－20℃，备用。

1.3 BAG-1及Bcl-2蛋白检测 采用免疫细胞化学染色SP法。浓缩型鼠抗人BAG-1单克隆抗体购自上海长岛生物技术有限公司，浓缩型鼠抗人Bcl-2单克隆抗体、SP试剂盒及DAB显色剂均购自北京中杉金桥生物技术服务有限公司。染色步骤按照试剂盒说明书进行，采用HL-60细胞系作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。BAG-1及Bcl-2蛋白阳性反应信号位于胞质，过表达时胞核、胞质均着色。分别按染色强度和阳性细胞百分率计分。……