王 鹏，任鹏飞，代丽萍，王凯娟，张建营#

1)郑州大学公共卫生学院流行病学教研室郑州 450001 2)河南省肿瘤流行病学重点实验室郑州 450052 #通讯作者，男，1962年10月生，博士，教授，研究方向:肿瘤流行病学，E-mail:jianyingzhang@hotmail.com

重组α2-HS糖蛋白的原核表达、纯化及免疫学活性分析*

王 鹏1，2)，任鹏飞1)，代丽萍1，2)，王凯娟1，2)，张建营1，2)#

1)郑州大学公共卫生学院流行病学教研室郑州 450001 2)河南省肿瘤流行病学重点实验室郑州 450052 #通讯作者，男，1962年10月生，博士，教授，研究方向:肿瘤流行病学，E-mail:jianyingzhang@hotmail.com

α2-HS糖蛋白;原核表达;蛋白纯化;抗原性

目的:原核表达并纯化具有生物学活性的重组α2-HS糖蛋白(AHSG)。方法:提取人肝癌细胞株HepG2细胞总RNA，逆转录得cDNA，PCR扩增出目的基因，与pMD18-T载体连接后，转化至大肠杆菌DH5α中，大量扩增后提取克隆质粒，连接至原核表达载体pEP-30a(+)中，转化BL21(DE3)，经IPTG诱导蛋白表达，通过镍离子亲和层析的方法纯化重组蛋白，采用SDS-PAGE电泳、免疫印迹杂交法对纯化产物进行分析鉴定。结果:成功构建了AHSG原核表达系统BL21(pET30a-AHSG)，最佳诱导条件为80 μmol/L IPTG诱导3 h;诱导表达的蛋白相对分子质量约54 600，主要以不溶性的包涵体形式存在，纯化后的重组蛋白质量浓度最高达2.3 g/L，经免疫印迹杂交鉴定有抗原性。结论:成功构建了AHSG原核表达系统，该系统可高效表达重组AHSG蛋白，该蛋白具有良好的抗原性。

α2-HS糖蛋白(alpha2-Heremans-Schmid glycoprotein，AHSG)是一种存在于人体血清中的糖蛋白。目前的研究［1-6］显示，AHSG与多种肿瘤关系密切，在肿瘤患者体内异常表达，是一种肿瘤相关抗原，有可能成为诊断肿瘤的一种血清学标志物。作者尝试应用大肠杆菌原核系统表达AHSG基因并对表达产物进行纯化，以获得大量的AHSG蛋白，为后续的AHSG作为一种血清学标志物在肿瘤早期诊断中的应用研究奠定基础。……